烟草青枯菌拈抗放线菌和细菌的田间试验

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1、烟草青枯菌拈抗放线菌和细菌的田间试验陆铮铮１，蒋选利２（１．遵义师范学院生命科学学院，贵州遵义５６３００２；２．贵州大学农学院/贵州省山地农业病虫害综合防治重点实验室，贵阳５５００２５）摘要：从健康烟草根围土壤中分离、筛选得到对烟草青枯病菌拮抗效果较好的放线菌和细菌。经鉴定两株拮抗放线菌均属链霉菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ），分别是绿色类群橄榄绿链霉菌（Ｓ．ｏｌｉｖａｃｅｏｖｉｒｉｄｉｓ）、粉红孢类群玫瑰暗黄链霉菌（Ｓ．ｒｏｓｅｏｆｕｌｖｕｓ）；拮抗细菌分别为蜡样芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）、球形赖氨酸芽孢杆菌（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈ

2、ａｅｒｉｃｕ）。在贵州省麻江县烟田进行田间试验，３次平均相对防效从大到小依次为粉红孢类群玫瑰暗黄链霉菌（６３．６５％）、球形赖氨酸芽孢杆菌（６０．０３％）、蜡样芽孢杆菌（４３．８５％）、绿色类群橄榄绿链霉菌（４１．７６％）、４０％硫酸链霉素（１７．１１％）。.jyqkycete；bacteria；fｉｅｌｄtesting收稿日期：２０１３－１０－２３基金项目：中国烟草总公司贵州省公司科技项目（２００９１７）；铜仁地区烟草公司项目［贵铜烟（２００９）１０］简介：陆铮铮（１９８６－），女，广西来宾人，助教，硕士，主要从事植物病害生物防治研究，（）１８２７５５３７７

3、００（电子信箱）ｌｕｚｈｅｎｇ＿ｚｈｅｎｇ＠１２６．ｃｏｍ；通信，蒋选利，教授，博士生导师，主要从事分子植物病理学研究，（电子信箱）ｊｘｌ３２３７＠１６３．ｃｏｍ。由青枯劳尔氏菌（ＲａｌｓｔｏｎｉａｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍＥ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ）引起的烟草青枯病，又称烟瘟、“半边疯”，素有植物“癌症”之称［１］。该病菌可以侵染５０多个科的２００多种植物［２］，传播速度快，存活时间长［３］，造成的危害严重，给许多农作物带来了巨大的伤害。目前对烟草青枯病的防治尚未有理想的药剂，且抗病品种的应用也常受到自然条件的限制和抗性丧失等问题的困扰［４］。Ｃｏｏｋ等［５］和Ｃｈｅ

4、ｆ［６］通过向土壤施加拮抗微生物来防治土传病害，并取得了一定的防治效果。研究者认为生物防治在未来农业生产中具有重要地位。前期研究分离了烟草根围土壤中的微生物，通过平板对峙法筛选出了２株拮抗放线菌（平均抑菌圈直径分别为４３．２０ｍｍ、５４．６６ｍｍ）和２株拮抗细菌（平均抑菌圈直径分别为３９．９８ｍｍ、４８．８８ｍｍ）。２０１１年４月，选择在贵州麻江杏山镇麒麟村烟田中进行田间效果试验，通过采用浸根、灌根的处理方法和３次病害调查的平均结果对田间效果进行了评价。１材料与方法１．１材料１．１．１供试放线菌和细菌选择抑制效果最好的２株放线菌，分别为绿色类群橄榄绿链霉菌（Ｓ

5、ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｏｌｉｖａｃｅｏｖｉｒｉｄｉｓ，编号为Ｆ４－３）、粉红孢类群玫瑰暗黄链霉菌（Ｓ．ｒｏｓｅｏｆｕｌｖｕｓ，编号为Ｆ６－３），用燕麦液体培养基培养，制成放线菌悬浮液。选择抑制效果最好的２株细菌，分别为蜡样芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ，编号为Ｃ３－５）、球形赖氨酸芽孢杆菌（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕ，编号为Ｃ５－３），用牛肉膏蛋白胨液体培养基培养，制成细菌悬浮液。１．１．２培养基［７］液体燕麦培养基：燕麦片３０ｇ、水１０００ｍＬ；固体燕麦培养基：在液体燕麦培养基中加琼脂２０～２５ｇ；液体牛肉膏蛋白胨培养基（ＮＡ）：

6、牛肉膏３～５ｇ、蛋白胨１０ｇ、ＮａＣｌ５ｇ、蒸馏水１０００ｍＬ；固体牛肉膏蛋白胨培养基：在液体牛肉膏蛋白胨培养基中加琼脂２０～２５ｇ。１．１．３试区概况及供试品种试验在麻江县杏山镇麒麟村烟田中进行，海拔９３０ｍ，常年连作烟草，烟草青枯病发生严重，供试烟草品种为南江３号（中感青枯病）。１．２方法１．２．１供试菌液制备方法用灭菌竹签挑取放线菌在固体燕麦培养基上扩大培养，于２８℃培养箱培养７ｄ后，用直径为５ｍｍ的打孔器打取放线菌的菌碟，取５个菌碟置于装有３００ｍＬ液体燕麦培养基的５００ｍＬ三角瓶中，于２８℃恒温摇床振荡培养４ｄ可获得放线菌悬浮液。用接种环挑取细菌于５

7、ｍＬ的无菌水中，混匀。用移液枪吸取０．１ｍＬ菌液分散地放于ＮＡ平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，约２０ｍｉｎ后，倒置于３２℃培养箱培养３ｄ后，用直径为５ｍｍ的打孔器打取细菌的菌碟，取５个菌碟置于装有３００ｍＬＮＡ液体培养基的５００ｍＬ三角瓶中，于３２℃恒温摇床振荡培养４ｄ后即可获得细菌悬浮液。１．２．２田间设置试验共设６个处理，处理一：含Ｆ４－３；处理二：含Ｆ６－３；处理三：含Ｃ３－５；处理四：含Ｃ５－３；处理五：４０％硫酸链霉素（２０００倍稀释液，药剂对照）；处理六：清水（空白对照）。每处理３个重复，共计１８个小区，随机区组排列。每小区种有烟

8、株８２穴，每个小区之间和田边都留出一行