拈抗细菌对烟草黑胫病的防治效果研究

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1、拈抗细菌对烟草黑胫病的防治效果研究-农学论文拈抗细菌对烟草黑胫病的防治效果研究李祝１，万科１，丛铭１，张传萍１，施渺筱２（１．贵州大学生命科学学院真菌资源研究所，贵阳５５００２５；２．贵州省安顺学院农学院，贵州安顺５６１０００）摘要：采用温室盆栽试验测试５株芽孢杆菌属生防细菌对烟草黑胫病的拮抗作用。结果表明，拮抗细菌芽孢杆菌１２０５对苗期烟草黑胫病有较稳定的防治效果，其分泌物还有促进烟株生长的作用，经鉴定１２０５菌株为蜡样芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）。关键词：拮抗细菌；烟草黑胫病；盆栽试验中图分类号：Ｓ４３５．７２文献标识码：A文章编号：0439－８114

2、（２０15）05－1094-03DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.05.016收稿日期：２０１４－０６－１６基金项目：贵州省科学技术厅、安顺市人民政府、安顺学院联合科技基金项目（黔科合Ｊ字ＬＫＡ［２０１２］０６号）；毕节市烟草公司项目作者简介：李祝（１９７８－），女，贵州毕节人，教授，博士，主要从事农业微生物学研究，（电话）１３５９５１５５０８１（电子信箱）ｚｈｕｌｉｌｕｃｋ＠１６３．ｃｏｍ。烟草黑胫病［Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｐａｒａｓｉｔｉｃａｖａｒ.ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ（ＢｒｅｄａｄｅＨｅａｎ）Ｔｕｋｅｒ］俗称烂腰病、

3、黑根病，是一种常见的土传真菌病害。烟草黑胫病在苗床及大田中均可发生，尤其是在高温高湿、多雨年份及低洼地区，该病发展蔓延快，在１～２周内可造成整块烟田毁灭，导致绝收［１，２］。随着生物技术的发展和相关研究的深入，生物防治成为烟草黑胫病的研究重点，特别是在利用有益微生物进行病害防治等方面［３－７］。本研究对筛选出来的５株生防细菌进行盆栽防效试验，以研究其对烟草黑胫病的拮抗作用。１材料与方法１．１材料烟草黑胫病菌病原菌烟草疫霉（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｐａｒａｓｉｔｉｃａＧｚｕｆｐ－９）由贵州大学生命科学院真菌资源研究室提供。拮抗细菌为芽孢杆菌１１０７、７４０３、１２０５、

4、１６０１、５８０１菌株。烟草品种为毕纳１号。１．２盆栽试验方法１．２．１烟草育苗采用漂浮育苗法，育苗前将浮盘和盛水方盘进行消毒，检查盘孔是否堵塞，用松散基质填满孔穴，用手指轻微下压至有实落感，约下压１ｃｍ，然后装满刮平露出盘面孔格，每孔播种毕纳1号种子２~３粒，播种后不再盖基质，立即放入盛有适量水的方盘内。待出苗具备２片真叶时即可进行间苗，确保每孔内有1株均匀一致的烟苗。在烟苗已具有４叶１心，苗高３～４ｃｍ时剪叶，剪去超过盘孔的根系控制大苗生长，促使小苗生长。后期剪叶两次，促进茎部的生长，达到炼苗的目的［８］。移栽，每盆１株，１０ｄ后进行处理。１．２．２烟草疫霉孢子悬

5、浮液的制备利用已分离出的烟草疫霉菌菌株Ｇｚｕｆｐ－９，参照烟草疫霉孢子悬浮液制备方法［９］制备烟草疫霉孢子悬浮液，孢子浓度为１０４个／ｍＬ。１．２．３拮抗细菌接种物的制备在ＮＡ平板上将分离得到的拮抗菌株１１０７、７４０３、１２０５、１６０１和５８０１活化，取两环活化的培养物分别接入盛有１００ｍＬＮＡ培养液的２５０ｍＬ三角瓶中，２８℃、１６０ｒ／ｍｉｎ培养３ｄ，得到拮抗菌株悬浮液。１．２．４接种方法病原菌接种采用王丽珍［１０］的方法，将烟草疫霉孢子悬浮液灌根接种于烟株根部土壤中。拮抗细菌采用灌根接种法，将已经制备好的浓度为１×１０８个／ｍＬ拮抗菌发酵液灌根，接种于烟株根

6、部土壤中。选择长势大小相近，苗龄４０ｄ的烟苗，移栽到盆内，每盆１株，移栽１０ｄ后接种，试验设６个处理，每个处理１５株，设３次重复。①处理组１：在烟株移栽１０ｄ后，首先接种拮抗菌发酵液１０ｍＬ，１０ｄ后再接种烟草黒胫病病原菌游动孢子悬浮液（１０４个／ｍＬ）１０ｍＬ；②处理组２：在烟株移栽１０ｄ后同时接种烟草黒胫病病原菌游动孢子悬浮液（１０４个／ｍＬ）１０ｍＬ和拮抗菌发酵液１０ｍＬ；③处理组３：在烟株移栽１０ｄ后，首先接种烟草黒胫病病原菌游动孢子悬浮液（１０４个／ｍＬ）１０ｍＬ，１０ｄ后再接种拮抗菌发酵液１０ｍＬ；④发病对照组：在烟株移栽１０ｄ后只接种烟草黒胫病病原菌游动

7、孢子悬浮液（１０４个／ｍＬ）２０ｍＬ，不接种拮抗菌；⑤拮抗菌对照组：在烟株移栽１０ｄ后接种拮抗菌发酵液２０ｍＬ，不接种病原菌；⑥空白对照组：在烟株移栽１０ｄ后接种清水２０ｍＬ。１．３小区试验在贵州省毕节市黔西县进行田间试验，所有试验小区的栽培条件均匀一致，试验期间管理按照常规进行，拮抗菌田间药效试验小区按随机排列的方式进行。１．３．１施药方法在烟株移栽前采用拮抗菌发酵液喷洒方式施用到土壤中，移栽后拮抗菌以灌根的方式接种到烟株根部。选用生产中常用的器械，菌种发酵采用泰斯特６０００Ⅱ型培养箱，记录所用器械的类型和操作条件的全部资料。菌种的施用应保证接种量