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1、浅析阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达：赵勇章必成朱宇泽欧武陵饶智国高建飞杜光祖【 目的：观察阿司匹林调节小鼠H22移植性肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)和p53的表达,探索该药抑制肿瘤的功能机制.方法：昆明种雄性小鼠60只，按随机分组为A~F6组；A~E组于前肢右腋皮下接种H22肿瘤细胞悬液(1×1010/L)0.12mL,24h后灌胃给药.A~C组分别给予80g/L，40g/L，20g/L阿司匹林1mL，D组予20g/L5?FU1mL,E组予生理盐水1mL，逐日1次，连续用药10d,停药
2、24h,称质量并正法动物,剥取瘤块称质量,计算出肿瘤生长抑制率,用免疫组化法检测癌细胞中VEGF和p53蛋白的表达.F组予饲料及水分正常饲养.结果： A，B，C，D组均有明显的抑瘤功能（分别为49.84%，23.89%，29.07%，54.63%）,其中以A组和D组的抑瘤功能最明显(和B,C组比较P<0.05).造模各组动物的肝癌细胞中均见VEGF和p53阳性染色,但阳性表达程度不同,和B，C，E组比较,阿司匹林大剂量（A）组和5?FU(D)组可降低肝癌细胞中VEGF，p53的阳性表达(P&l
3、t;0.05).结论：阿司匹林对小鼠H22移植性肝癌有抑瘤功能,抑制肿瘤生长的机制可能和下调VEGF和p53的水平有关.【阿司匹林H22癌肝细胞血管内皮生长因子类基因p530引言不少学者以为在肿瘤发生、发展和转移的各阶段,至少有两个或两个以上功能不同异常激活的癌基因各自发挥不同功能,并在时间和空间上相互配合，突变的p53基因增强了蛋白激酶C对血管内皮生长因子(vascularendothelialgroAb,p53mAb均购自晶美生物技术公司.1.2方法昆明种雄性小鼠60只,随机分为A~F6组；F组
4、为正常饲养组,A~E组进行造模.无菌抽取接种H22瘤种8d的小鼠的腹水,调细胞密度至1×1010/L,迅速右腋皮下接种0.12mL.24h后A组予80g/L阿司匹林；B组予40g/L阿司匹林；C组予20g/L阿司匹林；D组予20g/L5?Fu；E组予生理盐水,皆为1mL，1次/d.10d停药,24h后称质量并正法动物,用无菌操纵完全剥取瘤块称质量,计算出肿瘤生长抑制率：抑制率=［(阴性对照组均匀瘤质量-治疗组均匀瘤质量)/阴性对照组均匀瘤质量］×100%.生理盐水冲洗瘤块后,制成石蜡切片.未造模的1
5、0只为正常饲养组(F组),不作任何处理,予以上5组饲以正常饲料及水分,在实验结束时取肝组织,制成石蜡切片观察VEGF和p53表达.VEGF和p53表达按免疫组化说明书进行，选择切片中4个染色反应最强的视野,在400倍显微镜下,每例计数至少800个肿瘤细胞,细胞染色呈浅黄色至棕褐色均以为是阳性染色.计算出阳性染色肿瘤细胞和所计数之肿瘤细胞的百分比,根据百分比和着色深浅计分.无阳性细胞计为0分,阳性细胞百分比在0%~25%之间计为1分,在25%~75%之间计为2分,>75%计为3分［3］.统计学处
6、理：实验结果以x±s表示,多组间比较采用方差分析，两组间比较采用LSD检验(SPSS10.0),P<0.05为差异有统计学意义.2结果2.1H22移植性肝癌的抑瘤效果及VEGF,p53表达水平由表1可知，A,B,C,D各组瘤质量均低于E组(P<0.05)；A组和D组的瘤质量低于B,C组(P<0.05),抑制率均高于B,C组(P<0.05)；B组和C组瘤质量、抑制率差异无统计学意义(P>0.05).VEGF积分和p53积分A,B,C,D组均低于E组(P<0.05)；
7、A,D组低于B,C组(P<0.05)；A组和D组相比,差异无统计学意义(P>0.05).表1各组小鼠体质量、肿瘤抑制率的比较2.2VEGF和p53表达VEGF仅在正常小鼠肝脏内皮细胞有表达,而肝细胞未见阳性染色,也未发现p53阳性染色（图1A）.瘤组织中VEGF肝癌细胞浆染成棕黄色,呈阳性染色(图1B),造模各组均可见到,但阳性程度不同.造模各组中可见p53为细胞核阳性染色（图1C）.A：肝组织VEGF表达；B：瘤组织VEGF表达；C：瘤组织p53表达.3讨论VEGF,p53在肿瘤发生、
8、发展和转移的各阶段发挥着重要功能，目前的探究以为，它们之间的功能不是孤立的,可能在时间和空间上相互配合,协同促进了细胞的癌变［4］.Folkman以为，肿瘤的发生是一个多步骤的过程,而血管天生是肿瘤发展的限速步骤,在肿瘤进展中血管天生这一表型可能是原癌基因激活和抑癌基因失活的结果,这一点在Olga的试验中得到了证实:p53突变使VEGF的表达量升高,p53突变在肿瘤血管天生开关中起到了重要功能.从本实验结果看,肝癌组织VEGF,p53表达较正常肝组织有明显差异,说明肝
