有关黄酒内维生素e与微量元素硒对小鼠体内...

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1、实验题目：有关黄酒内维生素E和微量元素硒对小鼠体内自由基的清除作用的研究实验原理：自由基过剩使许多重要的生物大分子如核酸,蛋白质,膜多聚不饱和脂肪酸发生超氧化反应,产生有毒代谢中间产物,引起组织氧化损伤。维生素E对氧敏感，易被氧化，故可保护其他易被氧化的物质，如不饱和脂肪酸，维生素A和ATP等。减少过氧化脂质的生成，保护机体细胞免受自由基的毒害，充分发挥被保护物质的特定生理功能。硒可以通过一系列含硒酶，使许多脂质过氧化物、过氧化氢等得到有效的清除，改变体内有害自由基过剩的状态。试验通过研究黄酒内所含的维生素

2、E和硒对自由基的清除作用，来判断黄酒的抗氧化能力，由于自由基在体内浓度低,且很不稳定,需要用生化方法检测标本中的丙二醛的含量，了解体内自由基代谢情况，测定方法是丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。通过计算黄酒经过消化道作用后机体丙二醛的含量，推断黄酒对机体内自由基的清除效果，判断其抗氧化能力的大小。实验步骤

3、：一·配置含有黄酒不同的有效成分的灌服溶液1·取35只健康成年小鼠,秤量小鼠体重，雌雄各半，求平均体重m，一般成年人体重为M；2·经过分光光度计检测，求出黄酒所摄入的维生素E和硒分别是多少；3·设灌喂小鼠的一般摄入当量为x,则x=mX/M，求出每次小鼠摄入维生素E和硒的量；4·配置出每0.5ml所含VE和硒的量与每次小鼠通过饮用黄酒摄入的量相同的灌服溶液；二．小鼠分组，标记1·取30只健康青年小鼠，各项生理指标基本相同；2·将小鼠平均分成5组，分别记为A，B，C，D，E。A—VE,B—硒,C—VE和硒，依次

4、对应,D组为烟熏空白对照，E为非烟熏空白对照。每组中6只用于试验，均喂日常饲料。三．取组织，分析纯化，进行分光光度试验1·给各组小鼠做好标记后编号，灌喂相应的溶液，剂量相同，均为0.5ml，对照组灌服相同剂量的蒸馏水，灌服后4小时，把实验小鼠A，B，C，D组放在鼠笼中，在鼠笼中点燃1-2支香烟，E组不作任何处理，约30分钟，取出小鼠；2·用脱颈法杀死小鼠，用解剖剪刀剪开小鼠胸部，迅速取出每只小鼠的肺脏组织，各约0.04g；3·置预冷至4ºC的生理盐水中洗去表面残血，用滤纸吸干，称量待测组织样品的重量，用锡箔

5、纸包裹已测组织迅速放入到液氮里备用。4·将称量的肺组织样品与预冷的，含有l50mmol／LKCl的50mmol／L基氨基三羟甲甲烷(Tris)一HC1缓冲液(pH=7．4)以2mg：100μl的比例混合，另取一离心管制作空白溶液，用于分光光度试验作对照，以下处理与有组织的离心管相同；5·在低温（将试管至于盛有冰的烧杯中）下,将匀浆机转速调到最大，搅拌约40s，用匀浆机制成2％肺匀浆，配置体积约2ml；（打开水浴锅）6·取肺匀浆lmL，加入2ml生理盐水置10mL具塞离心管中，用混匀器混匀后静置l0min；7

6、·将混合匀浆置于离心机中，离心l0min(3000r／min)；8·取上清液2.5mL，加1.5mL0．67％硫代巴比妥酸(TBA)于离心管中，将离心管置于试管架上；9·离心管盖子不拧紧，连同试管架一起放入水浴锅中，沸水浴加热10min，取下，在冷水中迅速冷却至室温；（提前开始加热）10·离心5min(2000r／min)，取上清液，然后在721分光光度计532nm波长测定MDA—OD532光密度；11·记录数据，整理实验仪器。四·实验数据——各组三甲川的吸光光度值A组A1A2A3A4A5A6吸光度B组B1

7、B2B3B4B5B6吸光度C组C1C2C3C4C5C6吸光度D组D1D2D3D4D5D6吸光度E组E1E2E3E4E5E6吸光度五·对实验数据进行统计分析·单因素试验各处理重复数相等的方差分析各个小鼠组织中MDA-OD532nm的值总和平均值123456ABCDE合计