染色体标本的制备及组型观察 实验报告

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1、细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。染色体核型：某

2、一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以

3、来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。①空气干燥：使细胞与染色体易于分离②低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。③固定：Camoy’ssolution,使组蛋白变性

4、（变硬），维持染色体原有形态（1）描述染色体的四个参数①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100相对长度可以用来表示每条染色体的长度②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)臂指数可以用来确定臂的长度为了更准确的区别亚中部和亚端部着丝粒染色体1964年Levan提出划分标准：臂指数在1.0-1.7之间，为中部着丝粒染色体（M）；1.7-3.0之间，为亚中部着丝粒染色体（SM）；3.0-7.0之间，为亚端部着丝粒染色体（ST）；7.0以上，为端部着丝粒染色体（T）③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置按Lev

5、an的划分标准，着丝粒指数在50.0-37.5之间，为M；37.5-25.0之间，为SM；25.0-12.5之间，为ST；12.5-0.0之间，为T④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定端着丝粒染色体（T），NF=1中部，亚中部，亚端部着丝粒染色体（M,SM,ST）,NF=2（2）视野中染色体可能是20或40条左右，因为细胞可能处于减数第一次分裂和减数第二期分裂时期。1.实验步骤：（1）取雄性小鼠，以每克体重4微克注射秋水仙素（约1mL），14-16h后，用断头法处死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%NaCl溶液）洗去血污，置于解剖盘中。（1）将睾丸放入装有1mL0.3%K

6、Cl溶液的小烧杯中剪碎（液体呈乳白色）。（2）用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl溶液至4mL。（3）37℃静置30mins，低渗处理。（4）以800-1000r/min离心8分钟。（5）弃上清液，加入2mL甲醇·冰醋酸固定液。用吸管吹气，轻轻打散细胞，固定8mins。（6）再以800-1000r/min离心8分钟。（7）弃上清液，加入1mL甲醇·冰醋酸固定液制成细胞悬液，固定5mins。（8）取去洁净的低温预冷载片，距10-15cm的高度滴下2-3滴细胞悬液，从一边轻轻吹气，并随时轻轻敲打，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。（9）用滤纸擦去载片上的多余液体，空气干燥或文

7、火干燥，染色30-35mins。2.实验结果：视野中可见细胞分裂期中期细胞，呈棒状，有个别染色体被展开呈V字形，视野中也可见大量精子，处于分裂期但不是分裂中期的细胞。10*40显微镜下观察：（1）普通细胞普通细胞中，中期染色体40条（2）精子精子中，中期染色体20条3.分析与讨论（1）结果分析：本实验采用的是小鼠的精巢，所以视野中可见大量的精子，它们有一个比较圆的头部和鞭毛，有部分细胞在进行减数第一次分裂的中期，这样的细胞是二倍体，可观察到40条染色体，有些在进行减数第二次分裂中