pcr定量检测hbv-dna联合血清学标志物检查在临床中的应用

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1、PCR定量检测HBV-DNA联合血清学标志物检查在临床中的应四川省资阳市第一人民医院检验科641300摘要：目的探讨乙肝病毒DNA检测与乙肝血清学标志物检测的关系。方法采用PCR荧光探针定量(FQ-PCR)检测HBV-DNA,同时用时间分辨免疫荧光法(TRFIA)检测HBV血清学标志物HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBsAb和抗-HBc。结果HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA阳性率为93.55%,高于HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组(65.79%)和HBsAg、抗-HBc阳性组(41

2、.67%);且HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA含量为(8.70±1.98)×107旧/ml,明显高于HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组(8.09±4.45)×105IU/ml和HBsAg、抗-HBc阳性组(2.19±1.59)×105IU/ml,P<0.05差异具有统计学意义；HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组与HBsAg、抗-HBc阳性组HBV-DNA含量P〉0.05差异无统计学意义。结论PCR定量测定

3、HBV-DNA可以真实的反应患者体内病毒复制的动态情况，联合血淸学标志物的检查可以为临床用药的选择、疗效及转归提供依据。关键词：乙肝病毒DNA;血清学标志物；FQ-PCR；TRFIAHBV感染是全球的公共卫生问题。在我国，HBV携带率约占10%，是世界上最大的“肝炎大国”【1】。HBV感染后临床表现多样，可表现为急、慢性肝炎、重症肝炎、无症状携带者，部分慢性肝炎可演变为肝硬化或肝癌。目前，国内检测乙型肝炎最常用的方法是血清学标志物的检查和荧光定量PCR测定HBV-DNA,本文通过两种方法对乙型肝炎检测的关系分析，达到丫解

4、PCR技术在乙型肝炎临床诊断屮的作用。1材料和方法1、1标本采集收集本院2015年8月至2015年9月门诊及住院HBsAg阳性血清标本201例，其中男141例，女69例，年龄12〜79岁，平均年龄42.43岁。晨起采集静脉血3ml,非溶血、非脂血标本，严禁肝素抗凝。置于火菌的一次性试管中，室温自然凝固，严禁肝素抗凝。及吋分离血清，每例血清分成2份，一份用作TRFIA检测，一份用作FQ-PCR检测。1、2仪器和试剂血清学标志物抗原抗体检测采用上海新波技术奋限公司提供的Anytest吋间分辨荧光免疫分析仪，试剂来自苏州新波生

5、物技术有限公司提供的乙型肝炎病毒血清学标志物试剂盒（免疫荧光法）。血清HBV-DNA检测使用美国ABI-7500荧光定量检测仪，试剂来自广州达安股份有限公司生产的乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）。1、3方法1、3、1血清学标志物抗原抗体检测采用吋间分辨荧光免疫分析法,严格按照试剂说明书操作。1、3、2HBV-DNA用PCR荧光探针定量法检测。待检标本同阴性、临界阳性、强阳性对照一冋处理，用已知浓度梯度（2×103,2×104,2×105,2×106）的H

6、BV-DNA标准品为参照物，严格按照试剂说明书操作，采用煮沸裂解法，经荧光定量PCR扩增后绘制标准曲线，待测标本与其对比得出DNA含量。PCR扩增条件：93°C2min预变性，93°C45s–55°C60s10个循环，93°C30s–55°C45s30个循环。反应结束后仪器自动分析，得出标本的病毒含量。试剂盒最低检测限为l×102IU/mlo1、4统计学方法使用SPSS17.0统计软件，计量数据用Cx±s）表示，采用t检验行差异性分析，P<0.05差异有统计学意义。2结果

7、201例HBsAg阳性标本中，HBV-DNA阳性检出率为71.64%,其中,HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA阳性率为93.55%，高于HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组（65.79%）和HBsAg、抗-HBc阳性组（41.67%）;且HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA含量为（8.70±1.98）×107IU/ml,明显高于HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组（8.09±4.45）×105IU/ml和HBsAg、

8、抗-HBc阳性组(2.19±1.59)×105IU/ml,P<0.05,差异具有统计学意义;HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组与HBsAg、抗-HBc阳性组HBV-DNA含量P〉0.05,差异无统计学意义。HBV-DNA含量与血清学标志物的关系3结论乙肝病毒感染己成为危害人类健康的重