lc-q-tof在药物杂质鉴定中应用

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1、LC-QTOF联用技术在药物杂质鉴定中的应用浙江省食品药品检验研究院化药所杨伟峰杂质定义：药物化学实体之外的其他任何成分▲有机杂质（显著影响）种类：▲无机杂质（已知）▲残留溶剂（已知）杂质来源杂质可以分为工艺杂质（包括合成中未反应完全的反应物及试剂、中间体、副产物等）、降解产物、从反应物及试剂中混入的杂质等。按照其毒性分类，杂质又可分为毒性杂质和普通杂质等。杂质还可按其化学结构分类，如其它甾体、其它生物碱、几何异构体、光学异构体和聚合物等。起始物中间体降解物反应副产物药物质量和安全：显著影响有机杂质杂质谱I

2、CHQ3A人用药物注册技术要求国际协调会（ICH）日剂量＞2g：0.05%日剂量≤2g：0.10%鉴定阈值：杂质对比研究杂质对比研究是仿制药有关物质研究工作的重要环节。通过对比研究，比较试制品及被仿药品的实测结果，考察杂质种类是否一致，是否有新的杂质出现，杂质含量是否超过被仿药品，以确定后续进一步的研究工作方向。杂质对比研究结果杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，各杂质含量也不超过被仿品，无含量超过鉴定限度的新杂质这种情况说明试制品的杂质控制达到了预期目标。若通过改进工艺，杂质含量仍不能降至鉴定限度以下

3、，则应参照杂质研究指导原则中杂质研究决策树进行后续的研究，必要时应提供杂质安全性的试验研究资料。但一般情况下，提供额外的安全性论证资料，往往不如通过改进工艺把杂质水平控制在限度值以下更为简便。杂质对比研究结果杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，没有超过鉴定限度的新杂质，但一个或多个杂质的含量超过了被仿品这种情况下，应当通过改进完善制备工艺，降低杂质的含量。杂质鉴定的难点1、杂质含量低，采用制备色谱分离纯化，所需的样品量较大。2、在分离纯化的过程中容易发生再次降解。3、由于制备色谱柱的柱效较低，有时难以得

4、到有效分离。高灵敏度高选择性不经纯化即可获得化合物信息HPLC-Q-TOF联用技术头孢拉定有关物质测定1.23%未检出7-ADCA和双氢苯甘氨酸时间（min）甲醇%水相%0158510158510.1307037307037.11585451585色谱柱温度：35℃；流速：0.9mL·min-1；检测波长：254nm；水相为水-2.18%醋酸铵（1564:30）用4%的醋酸调pH至4.0，进行梯度洗脱杂质XY杂质群鉴定杂质X的结构头孢氨苄头孢拉定未知杂质相对丰都：19.9%、18.8%、19.7%不饱和度：

5、10、9、8偏差均小于3.6ppm杂质的裂解途径Fragmentor150→200V杂质X来源分析双氢苯甘氨酸四氢苯甘氨酸苯甘氨酸四氢苯甘氨酸可能的裂解途径Y杂质群综合解析多一个氧原子1~5易脱水6不易脱水1、3、6为同分异构体2、4、5为同分异构体解析结果HPLC-QTOF-MS联用技术鉴定盐酸吉西他滨中的未知杂质注射用盐酸吉西他滨尚未被中国药典收载，地方试行标准以及美国药典有关物质检查项下仅对胞嘧啶及其α异构体进行控制原料药冻干粉针剂120606A120903110801111001杂质总量%0.086

6、0.0390.150.13未知杂质含量%0.0630.0260.110.11USP方法测定结果样品溶液在24h内稳定，热破坏3h后未知杂质达3.692%注射用盐酸吉西他滨Q-TOF高分辨质谱结果分析GemcitabineUnknownimpurity多了一个O原子少了一个N原子，符合氮规则，不饱和度也未变化偏差均小于17吉西他滨裂解途径吉西他滨m/z112离子胞嘧啶母离子未知杂质m/z113离子尿嘧啶母离子注射用吉西他滨杂质吉西他滨杂质：2’-脱氧-2’，2’-二氟尿苷胞嘧啶离子尿嘧啶离子偏差均小于23NM

7、R结构确证H-HcosydFdU来源分析胞嘧啶、六甲基二硅胺烷和硫酸铵高温回流1h在企业提供的起始原料胞嘧啶中没检查出尿嘧啶，但是在水浴2h后尿嘧啶明显增加到2.1%。来源一来源二从合成过程分析，反应液先在甲醇中析晶得到粗品，再将粗品溶解于50℃超纯水中，最后于60℃的丙酮中重结晶得到盐酸吉西他滨成品，所以需要对温度、受热时间、以及充氮气是否对杂质产生影响做考察。高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法分析克拉屈滨注射液中主要杂质及其来源克拉屈滨结构式克拉屈滨为核苷类抗白血病药色谱柱GraceC18(250mm×

8、4.6mm,5μm),流动相为10mmol.L-1乙酸铵溶液-甲醇(80:20),柱温35℃,检测波长为265nm.以ESI为离子源,克拉屈滨注射液色谱图克拉屈滨不同能量下的二级质谱图30kv30kv30kv15kv克拉屈滨杂质二级质谱图克拉屈滨及其主要杂质的高分辨质谱数据Compounds[M+H]+Experimentalvalue（m/z）Theoreticalvalue（m/z）Deviation（×10