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1、第621期李盛文等:松浦红镜鲤保种群体的遗传结构王卫军等:短蛸繁殖行为及胚胎发育过程77DOI:10.3724/SP.J.1118.2014.00067松浦红镜鲤保种群体的遗传结构李盛文1,2,贾智英1,柏盈盈1,2,李池陶1,石连玉11.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;2.上海海洋大学水产与生命学院,上海201306摘要:应用35对多态性较高的微卫星标记对鲤新品种——松浦红镜鲤(Cyprinuscarpiovar.songpuredmirrorcarp)的保种群体进行了遗传结构研究。结果显示,在91尾松浦红镜鲤个体中,共检测到140个等位基因,每个位点等
2、位基因数3~6个,平均有效等位基因数为3.0426;期望杂合度范围为0.3750~0.8274,均值为0.6493;多态信息含量范围为0.396~0.912,均值为0.5869;哈迪−温伯格平衡检验结果表明群体处于不平衡状态;平均固定系数为-0.026,说明该群体存在杂合子过剩现象;瓶颈效应分析表明,群体已经历了瓶颈效应;根据连锁不平衡方法计算有效群体大小为31.2。该研究表明松浦红镜鲤遗传多样性较为丰富,为了在下一步保种工作中避免或降低瓶颈效应,应加强保护工作,从而保持其丰富遗传多样性和优良的经济性状。关键词:短蛸;繁殖行为;胚胎发育松浦红镜鲤;微卫星;群体遗传结构;保种中图分类号:
3、S917Q959;S96文献标志码:A文章编号:1005-8737-(20102014)06011-0067-08第621期李盛文等:松浦红镜鲤保种群体的遗传结构王卫军等:短蛸繁殖行为及胚胎发育过程77松浦红镜鲤(Cyprinuscarpiovar.songpuredmirrorcarp)是以荷包红鲤(Cyprinuscarpiovar.wuyuanensis)为母本,以散鳞镜鲤(CyprinuscarpiohaematopterusTemm.etSch.)为父本杂交后分离出来的红色个体为选育基础群,以生长快、体色橘红、纺锤形、鳞被框形为选育指标,采取多性状群体选育与分子生物学技术相结
4、合的育种技术,育成的一个集观赏、食用为一体的鲤新品种。该品种于2011年12月通过全国水产原种和良种审定委员会的审定,品种登记号:GS01-001-2011。在水产养殖业中,随着鱼类新品种的不断问世,如何保持新品种优良经济性状不仅成为育成品种需要解决的重要问题,也是渔业是否能够稳定快速发展的根本问题,因此对选育品种的有效管理至关重要。微卫星标记技术在水产上的应用现已成熟,目前鲤微卫星标记已经得到大规模的筛选[1−3],而且在种质资源管理方面得到较为广泛和有效的应用,如贾智英等[4]、石连玉等[5]分别对松浦鲤和松荷鲤保种群体遗传多样性和遗传结构进行了研究,表明人工选择压力对保种群体造成
5、较大影响,但其仍具有较丰富的遗传多样性。李建林等[6]利用微卫星标记分析了建鲤的种质资源,表明建鲤群体遗传多样性水平较高,具有较大的选育潜力。而有关松浦红镜鲤保种群体遗传结构方面的研究至今未见相关报道。本研究针对这一情况选取了35个微卫星标记进行松浦红镜鲤遗传结构方面的研究,分析其遗传多样性参数,从而为松浦红镜鲤种质资源的可持续发展奠定基础。1材料与方法1.1材料松浦红镜鲤91尾,采自黑龙江水产研究所松浦实验站。样品均剪取鳍条,放入盛有75%酒精的1.5mL离心管中,带回实验室放入-20℃冰箱保存。1.2方法1.2.1DNA提取和引物来源采用酚-氯法[7]提取基因组DNA,经琼脂糖凝胶
6、(胶浓度1%)电泳和紫外分光光度法检测其纯度和浓度,稀释成50ng/μL质量浓度作为PCR第621期李盛文等:松浦红镜鲤保种群体的遗传结构王卫军等:短蛸繁殖行为及胚胎发育过程77扩增的模板。微卫星引物查阅相关文献[8−10],由上海博尚生物技术有限公司合成。1.2.2PCR扩增PCR反应体系25μL,模板DNA30~50ng,2×EsTagMasterMix12.5μL(康为世纪生物公司,产品号CW0690)上、下游引物各1μL(10μmol/μL),用灭菌双蒸水补足体积。反应条件为:95℃预变性5min;94℃变性30s,最适退火温度退火30s,72℃延伸30s,24~30个循环;7
7、2℃延伸5min,4℃保存。1.2.3电泳及染色PCR产物用8.0%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。电泳结束后,用硝酸银染色后拍照记录电泳结果。电泳图谱利用Gel-proanalyzer4．5软件分析,结合PCR产物长度及双核苷酸重复确认片段大小并判定基因型。1.2.4数据分析利用PopGene(Version3.2)[11]软件分别对观测等位基因数(observednumberofalleles,A)、有效等位基因数(effectivenum
