姜黄素逆转p糖蛋白介导的膀胱肿瘤多药耐药的实验研究.doc

《姜黄素逆转p糖蛋白介导的膀胱肿瘤多药耐药的实验研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、姜黄素逆转P糖蛋白介导的膀胱肿瘤多药耐药的实验研究作者：王磊柯红王一羽任东明【摘要】目的研究姜黄素对P糖蛋白介导的膀胱肿瘤多药耐药的逆转作用。方法采用MTT法测定药物的体外杀伤作用，应用流式细胞术测定细胞内罗丹明浓度。结果姜黄素不增加阿霉素对BIU-87的细胞毒性作用(P〉)；而对于BIU-87/ADR,姜黄素明显增加阿霉素细胞毒性(P<)，逆转指数为。姜黄素明显抑制p-gp的药物外排作用可能是关键因素。结论姜黄素通过抑制p-gp的药物外排作用有效逆转多药耐药。【关键词】姜黄素P糖蛋白阿霉素多药耐药逆转化疗是膀胱癌术后治疗的重要方法。膀胱肿瘤具有易复发和产生多药耐药(multidrugresi

2、stence,MDR)的生物学特性，加强膀胱癌MDR逆转研究具有重要意义。就目前研究而言，MDR的逆转包括以下策略：使用化疗增敏剂、药物化学修饰、反义技术、载体技术等，对植物药研究较少。本实验拟观察姜黄素能否逆转多药耐受糖蛋白(P-glycoprotEin,P-gp)介导的膀胱癌MDR、逆转效果及其可能机制。1材料与方法材料姜黄素，罗丹明一123及MTT均为Sigma公司产品。盐酸阿霉素为深圳万乐药业公司产品。DMEM培养基为Gibco公司产品。膀胱移行细胞癌株BIU-87，由北京医科大学泌尿外科研究所馈赠；耐药株BIU-87/ADR系由本实验室通过采用递增阿霉素剂量的方式诱导建立的呈典型MD

3、R表型的耐药细胞亚株。高表达P-gp。细胞在含mg•L_1浓度的阿霉素、10%胎牛血清的DMEM培养基中以37°C，5%C02条件培养，实验前2d换无药培养基培养。方法MTT实验将处于对数生长期的两种细胞分别以2X104/ml浓度接种于96孔培养板，每孔终体积2⑻yl。上述条件下培养24h,小心吸尽每孔培养液。实验组I分别加入不同浓度的阿霉素、实验组II分别加入不同浓度的阿霉素加姜黄素。阿霉素终浓度分别为，，，，5(ug/ml),姜黄素终浓度为25nmol-L-lo对照组I为不加细胞仅含培养液的空白对照，对照组II为不加药物仅加细胞的阴性对照，以上述条件培养48h后，每孔加MTT(5mg/ml

4、)液2Oul，37°C继续孵育4h，终止培养，小心吸弃上清液，每孔加150U1DMS0,振荡lOmin使结晶物充分溶解。由空白孔调零后，以酶标仪检测49Onm处的光吸收值(A)。细胞存活率(10=实验组平均A值/阴性对照组平均A值逆转指数(RI)=IC50(BIU-87/ADR+ADR)/IC50(BIU-87/ADR+ADR+CUR)罗丹明外排实验罗丹明作为P糖蛋白的转运底物能较好的代表其转运功能［1,2］。将处于指数生长期的BIU-87/ADR细胞以2X104/ml接种于24孔培养板，每孔终体积lml。上述条件下培养24h。小心吸弃培养液，加入罗丹明至终浓度为5ug•ml-l，上述条件继续

5、培养30min，吸弃培养液，加入不含罗丹明的培养液。实验组I仅含培养液和细胞，实验组II在I的基础上加入姜黄素至终浓度为25umol-1-1,对照组为含细胞不加药液组。分别于0，，，h收获细胞。细胞收获方法为：吸弃培养液、％胰酶消化、冷PBS(0°C)吹洗、离心(800r/min)3次后，500u1冷PBS吹散细胞，在流式细胞仪上检测(激发波长480nm,发射波长540〜660nm)，以荧光强度平均值表示细胞内罗丹明浓度。细胞内罗丹明浓度以下式计算：4=实验组平均荧光强度值-对照组平均荧光强度值。统计学处理实验结果取3次实验的均值，标准差均小于5%,组间显著性差异用t检验。2结果MTT试验预试

6、验以姜黄素最高浓度25umol•L-1作用两细胞株48h,细胞存活率均在95%以上，排除了对细胞的毒性作用。结果表明，姜黄素略增加阿霉素对BIU-87的细胞毒性作用(P〉)；而对于BIU-87/ADR,姜黄素明显增加阿霉素细胞毒性(P<)，逆转指数为。表1细胞毒分析1C50氺p>，氺氺p<细胞内罗丹明浓度图1为不同时间段细胞内罗丹明浓度的流式细胞仪检测结果。可以看出，在每一时间点，姜黄素组R-123浓度均显著高于无姜黄素组。姜黄素明显抑制了细胞内R-123的外排（P图1R-123外排实验3讨论尽管生物技术飞速发展，传统医学在世界的许多地方仍发挥着极其重要的作用。姜黄素是从姜科姜黄属植物姜黄根茎

7、中提取的一种酚类色素。姜黄素及其类似物和挥发油是姜黄主要活性成分，具有抗炎、抗菌、保肝、治疗创伤、抗癌、抗病毒等活性。其抗肿瘤作用及机制正受到日益重视。有文献表明，姜黄素对人类恶性肿瘤细胞有诱导分化和增殖抑制作用［3,4］，近年研究表明，姜黄素可促进肿瘤细胞凋亡［5,6］，并且与阿霉素、丝裂霉素具有协同作用［7〜9］;有人认为其具有化疗增敏作用［10］。本实验结果显示，姜黄素可以有效逆转膀胱肿瘤的