陕油8号种子纯度的鉴定研究

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1、第一章文献综述方法。Dedryver等(1996)【1321已经成功地将小麦锈病基因Lr24的RAPD标记转化为稳定的SCAR标记。1．2．1．2．3小卫星DNA小卫星DNA是1980-1984年间由人类遗传学家相继在人体基因组中发现的。它是由长度为10—60bp的核心序列串联重复形成的可达25Kb的串联重复序列，可遍布于基因组的很多位点(E1yet．al，1991)【””。人类基因组中包含高达30％的重复DNA序列，其它真核生物亦如此。小卫星DNA在真核基因组中具有多等位性、高丰富性和极强的保守性，在不同个体之间存在有串联数目的差异，这种多态性可能是在DNA复制或不等交换过程中

2、发生的(Jeffreys，1985)【13“。以重复序列的核心序列为探针，与基因组的限制酶谱进行杂交，从而得到该物种的DNA指纹图谱。因其含丰富的多态信息，选择合适的限制酶类和探针，便可得到具有个体特异性的指纹图谱。目前已经发现了～些十分有用的小卫星探针。Wassart等(1992)[z47l在小麦基因组文库中筛选到了一个4．ikb的DNA克隆pTa9546，用该克隆作探针能够检测到小麦lo条染色体上12个位点的等位变异区分出参试的56个普通小麦品种，是绘制小麦指纹图谱非常有用的探针。1．2．1．2．4微卫星DNA(又称simplesequencerepeats，简称SSR)在人

3、类及动植物的基因组中，均存在着许多由1-5个碱基对组成的简单重复序列，如(GA)。、(AC)。(GAA)。等。同一类的微卫星可分布于整个基因组的不同位置上，每个座位上重复单位的数目及至重复单位的序列都可能不完全相同，因而造成了每个座位上的多态性。与RFLP标记相比，SSR检测的多态性频率要高很多：Gregan(1994)1194]在96份大豆资源中，发现了多达29个SSR等位变异，而通常用RFLP仅能发现2—3个等位变异。可见SSR标记的多态性信息含量是较高的。由于每个微卫星DNA两端的序列多是相对保守的单拷贝序列，因而可根据其两端的序列设计一对特异引物，通过扩增而产生多态性。1

4、．2．1．2．5AFLPAFLP技术是1992年荷兰Zabeau等人⋯91发明的一项技术。其基本原理是选择性扩增基因组DNA的酶切片段，由于不同材料的DNA酶切片段存在差异，因而便产生了扩增产物的多态性。选择性扩增是通过在引物3’端加上选择性核苷酸而这现的，改变选择性核苷酸的数目，就可以预先决定所要扩增的片段的数目。可见AFLP实际上是RFLP着NPCR相结合的一种方法，它结合了RFLP稳定性PCR技术高效性的特点。AFLP可以分析基因组较大的作物，其多态性很强，利用放射性标记在变性的聚丙烯酰胺凝胶上可检测到100-150个扩增产物，因而非常适合绘制品种的指纹图谱及进行分类研究。

5、Dedryver等

6、1321利用14份水稻材料比较AFLP和RAPD的实验结果，发现RAPD方法21个引物获得103条扩增带，43个标记，而AFLP方法18个引物获得了529条带，147个标记。AFLP虽产生不久却倍受青睐，己应用于水稻(Mackill，1996，Choet．al，1996；Maheswaranet．al，1997)[138,131,I39]、大豆(Keimet．a1，1997)11741、大麦(Qix，1997)[187]、土豆(Bachemet．al，1996)[t30]等多种作物上，所有研究表明AFLP产生的多态性远远超6陕油8号种子纯度的鉴定研究过RFLP

7、、RAPD等技术，因而被认为是指纹图谱技术中多态性最丰富的一项技术，可应用于一般分子标记技术的所有应用范围(张修军，1999)U7]。但该技术的缺点是需要同位索检测，同时成本也较高，另外AFLP已申请专利，人们可以自由利用该项技术用于非赢利性的科学研究，但生产及商业上的应用受到限制。近来用银染法代替同位索法检测扩增产物，取得较好的效果，不仅降低实验成本，缩短试验周期，而且提高了AFLP技术的实用性(张峰，[999)【l”。除上述五种DNA指纹图谱技术外，Zhu等(1995)[1501发明了新的绘SUDNA指纹图谱的方法，称为随机末端引物重复序列间扩增(randomendprime

8、ramplificationofinterspersedrepeats，简称REPAIR)。用该方法，仅需2-3个引物就可鉴别出50个水稻品种的大多数，并能识别其中三个人为设置的重复。现代分子标记技术发展非常迅速，随时都会有新的标记技术被发明、被利用。密切注视这方面的发展动向，就能不断以新的、先进的分子标记技术丰富DNA指纹图谱技术。CAPS法可靠检测某等位基因中，因～个碱基突变而产生的独特的限制酶切位点，但通常单个碱基的突变大多数不能创造这样的酶切位点，而限制了其使用。随着高通