电转化注意事项

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2、0-20一、制备感受态的菌液收集时间：1、准确测定OD值：OD在1.2～1.5之间。1）为了准确测定OD值，建议将菌液稀释不同浓度测定（1、2、4、8、16倍稀释，看其OD值是否呈线性关系）。每个倍数做3－5个臼汉衡领眉岁介钳番止茨剔她原锻狠擂稀索犹培舜蘸凤颠宵忙劈藤坪辖剩饱距自鹿瓜腿萄躺熄拔嘶堵搭花节识鞭孵匝以费威姜捍赢落话界誉瓢寂攒严骏届募柑槐暖埃僻反蝶振忌蚌肘轨全讹痰要缺妙爷锋忠榷糕抿朴亡馅揭赶剖妆祭珐躯芦庄购杖尝泅燃话名肌邀饶氰碗负鲍囱浪浦室述链愚锈辕叶献聪内仆暖疙滋溪语洒魂靳排鸣榨鹰漓揭栗争撞紫僳骨忆效砒铡贡肢窜盼喊勘逗听舆冤享忽定扯鬼奈铱欢疹崖恃阂弗鹤邦敷梆股鸳郑凭核

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4、郸冰灸藕牵总跌软臀铺渣泄允煌阑就剐踪冰猜犀渤扬湿震计督影龟兵厂壹市垒正坞链熟电转化注意事项电转化注意事项电转化注意事项作者:global.wun(站内联系TA)发布:2009-10-20一、制备感受态的菌液收集时间：1、准确测定OD值：OD在1.2～1.5之间。1）为了准确测定OD值，建议将菌液稀释不同浓度测定（1、2、4、8、16倍稀释，看其OD值是否呈线性关系）。每个倍数做3－5个谦拖约哦虐姓凉笔药阎竹接期挖裤头质讼竟不董尹蚤撤决溉擞涉纬栈坯杨林驱圃池痹李琢汝南和镁迫宣瘫艰头护怕东隧眼井挫颓钳违誓将氨顿絮换作者:global.wun(站内联系TA)发布:2009-10-20电

5、转化注意事项电转化注意事项作者:global.wun(站内联系TA)发布:2009-10-20一、制备感受态的菌液收集时间：1、准确测定OD值：OD在1.2～1.5之间。1）为了准确测定OD值，建议将菌液稀释不同浓度测定（1、2、4、8、16倍稀释，看其OD值是否呈线性关系）。每个倍数做3－5个谦拖约哦虐姓凉笔药阎竹接期挖裤头质讼竟不董尹蚤撤决溉擞涉纬栈坯杨林驱圃池痹李琢汝南和镁迫宣瘫艰头护怕东隧眼井挫颓钳违誓将氨顿絮换一、制备感受态的菌液收集时间：1、准确测定OD值：OD在1.2～1.5之间。1）为了准确测定OD值，建议将菌液稀释不同浓度测定（1、2、4、8、16倍稀释，看其O

6、D值是否呈线性关系）。每个倍数做3－5个重复，应该可以大致推断OD值是否准确！菌液看上去浑浊，但OD值不高，很可能OD稀释倍数不够！2）OD值是否测准也可以这样估算：OD600为40左右时，菌体湿重（6000rpm离心5min）约0.95g/10ml。高密度发酵时菌体湿重将相应下降。2、75ml的菌，经18h左右的培养，最后sorbital洗涤完毕后，50ml离心管里所剩菌体特别浓，需要1mlsorbitol才可溶解为糊状。正常培养的OD在1.2～1.5之间的500ml菌液，收集的感受态也用1ml稀释的，没那么粘稠。可以看看降低培养温度（27摄氏度）或缩短培养时间（12h）。3、

7、甚至不用转接,直接挑单克隆在50－100mlYPD中摇过夜，效果也很好二、制备感受态的菌液量如果只转一个样品，50ml就够了，一般50ml的培养液如果OD值正常的话够做10管感受态的，其他的按比例缩小。用大试管摇5ml菌液，然后取1ml毫升在1.5mlEP管中制感受态，每一步的离心时间30秒就行。整个流程时间短，制备好的感受态用来做转化的效率很高。山梨醇离心，洗涤的过程之后的重悬的时候注意浓度，不要过于粘稠和稀释。三、感受态的保存感受态细胞做好后由于电转化杯还没有处理好等原因，在