宫颈鳞癌放疗前后病理组织学、细胞凋亡、增殖细胞核抗原及p53的变化

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1、宫颈鳞癌放疗前后病理组织学、细胞凋亡、增殖细胞核抗原及p53的变化【摘要】目的探讨放疗前后宫颈鳞癌组织细胞凋亡情况以及p53蛋白的表达对宫颈鳞癌组织细胞凋亡的影响。方法32例放疗前、后的宫颈鳞癌活检标本，分别进行凋亡细胞的原位检测(TUNEL)、增殖细胞核抗原（PA）、p53蛋白的免疫组化染色检查。结果宫颈鳞癌放疗后细胞凋亡指数明显高于放疗前（26.63±0.37vs.11.03±0.33，P＜0.01）；高增殖能力组细胞凋亡指数明显高于低增殖能力组(20.00±15.56vs.5.21±3.79,P<0.05)。放疗后的PA表达指数显著低

2、于放疗前（31.00±10.63vs.78.50±6.30,P＜0.01）。放疗前后p53染色阳性率差异无显著性（P＞0.05)；p53阳性组细胞凋亡指数与p53阴性组差异无显著性(P＞0.05)。结论宫颈鳞癌组织中细胞增殖活跃则自发性凋亡相应增多；放疗后PA指数显著降低，而凋亡指数显著增高。【关键词】宫颈鳞癌;细胞凋亡;增殖细胞核抗原;p53蛋白;放射治疗Abstract:ObjectiveToinvestigatetheapoptosisofcervicalsquamous-cellcarcinomacellsbeforeandafterra

3、diotherapyaspactofp53expressiontothecells.MethodsBiopsycervicalsamplestakenbeforeandafterradiotherapyin32patientsous-cellcarcinomaunderinationbyin-situTUNEL,PAandp53stainingbyimmunohistochemistry,respectively.ResultsTheapoptoticindexincervicalsamplestakenafterradiotherapyples

4、takenbeforeandafterradiotherapy(P＞0.05).Nosignificantdifferencesous-cellcarcinoma,cellsarkableincreaseinapoptoticindex.Keyous-cellcarcinoma;apoptosis;proliferatingcellnuclearantigen(PA);p53protein;radiotherapy宫颈癌是我国女性高发肿瘤之一，宫颈癌的主要组织学类型为鳞癌，放射性治疗是宫颈鳞癌治疗的有效手段之一。目前国内有关宫颈鳞癌组织放疗后肿瘤

5、凋亡、增殖的研究较少，因此我们应用免疫组织化学染色及TUNEL染色，检测32例宫颈鳞癌活检标本放疗后的病理组织学变化及与肿瘤细胞增殖、凋亡有关指标增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PA)、p53的变化，以探讨放疗对于宫颈鳞癌组织细胞增殖、凋亡的影响。1资料和方法1.1一般材料宫颈鳞癌患者32例，均为在徐州矿务局总医院放疗科1997年1月—2000年12月收治的病例。所有病例于放疗前和放疗后1个月在相应区域取材，经甲醛固定、石蜡包埋连续切片后，分别进行苏木精-伊红染色、TUNEL染色、PA和p53免疫组

6、织化学染色。1.2方法1.2.1TUNEL染色常规脱蜡脱水，过氧化氢封闭后，微波处理20min。TDT酶、biodUTP37℃孵育1h。生物素标记-HRP37℃孵育1h。DAB显色、衬染、脱水、封片。用已知的阳性对照片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。1.2.2PA和p53免疫组化染色PA采用兔抗人单克隆抗体(PC10）,p53免疫组化采用抗p53蛋白鼠单克隆抗体（DO-7）。切片均用10mmol/L枸橼酸缓冲液（pH7.2）沸腾处理20min，用一抗处理过夜。每组切片应用各自的抗体温育，PBS液分别冲洗3次；DAB显色。用已知的PA、p

7、53阳性对照片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。1.3结果判断标准1.3.1病理组织学的评价标准主要为核变性、核溶解、胞质角化（空泡化）、异物巨细胞反应、癌组织再生反应、间质炎性反应、纤维化、核分裂指数、间质退变等。1.3.2PA和p53免疫组化染色判定PA和p53染色阳性为棕黄、棕褐色，定位于肿瘤细胞的细胞核，随机选取10个高倍视野，计数阳性细胞数，计算阳性率。其中p53阳性细胞计数>10%,判定为阳性；PA阳性细胞数>50％，判断为肿瘤组织增殖能力高。1.3.3凋亡指数细胞核染成棕褐色为凋亡细胞，随机计数10个低倍镜视野凋

8、亡细胞数作为凋亡指数。1.4统计学处理计量资料以±s表示，组间比较采用t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有显著性。