微生物检验教学课件（扬州大学）第八节_金黄色葡萄球菌检验

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1、第八节金黄色葡萄球菌检验由金色葡萄球菌肠毒素引发的中毒暴发事件，近年来首推2000年日本“雪印奶粉”事件，14000多人受感染。分类1、过去曾根据菌落色素不同分为三个种：金黄色sta.柠檬色sta.白色sta.2、1974年分类系统：依据细胞组成、是否产生血浆凝固酶、分解甘露醇的能力，有无SPA与DNA酶等性状，将其分：金黄色sta.表皮sta.腐生sta.3、最新分类系统：共分28个种，其中23个种为凝固酶阴性，从动物分离的常见的有14种（其中凝固酶试验、DNA酶试验阳性有3种）形态特征葡萄球菌呈球状，直径为0.5~1.5

2、um；固体培养基上生长的细菌呈典型的葡萄串状排列；但在脓汁或液体培养基中常为双球状或短链状排列无鞭毛、无芽胞，一般不形成荚膜。G+，但衰老、死亡或被白细胞吞噬后的菌体常转为G－。GramstainofStaphylococcusaureusinpustularexudate（二）培养特性葡萄球菌对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧菌。致病菌株最适生长温度为37℃，最适pH7.4。1、在普通琼脂平板上24~48小时，形成：光滑、湿润、隆起的边缘整齐、不透明的圆形菌落，直径1~2mm，也有的达3~4mm，在有氧

3、环境中可产生色素，在无氧环境中不产生色素。2、在血琼脂平板上形成较大的菌落，多数致病菌株能形成β溶血。3、在普通肉汤中生长24小时，呈均匀混浊，管底有少量沉淀，培养2~3天后可在培养基表面形成很薄的菌环。4、大多数致病菌株能耐高浓度NaCl，即可在含10~15%NaCl培养基中生长，故对严重污染的病料可用却蒲曼琼脂分离细菌。（三）生化特性多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气;致病性葡萄球菌具有DNA酶、血浆凝固酶和分解甘露醇的能力，而非致病性葡萄球菌则无。其他一些重要特征金色葡萄球菌竞争能力差，由于食品中除金色

4、葡萄球菌外，还有其他腐生菌的存在，对金色葡萄球菌的生长会产生拮抗作用。葡萄球菌为耐盐菌，在1015%的盐浓度下仍可生长繁殖，因此在一些腌制的肉中此均仍有繁殖的可能性。对热比较敏感，巴氏消毒可以杀死牛奶中金葡萄。对人的致病作用发挥致病作用的主要为肠毒素，该毒素耐热强。引起食物中毒的主要为奶制品、熟肉类，以及含淀粉较高的米饭、糕点等。食物中毒潜伏期短，一般在食后26小时发生比较剧烈的呕吐，也可伴有腹痛及腹泻，体温不高，有的则表现为流涎、恶心、干呕及腹部痉挛等。经12天后，多可自愈，很少引起死亡等。选择性培养基的制作金黄色葡

5、萄球菌的选择性培养基多根据其耐盐，在有氧、无氧情况下均能发酵甘露醇产酸等特性而设计的。常用的有却莆曼琼脂平板（形成黄色针尖状细小菌落；）、亚碲酸盐琼脂平板（长成黑色菌落）等。附：却甫曼琼脂牛肉膏5g示蛋白胨10g甘露醇10g氯化钠75g琼脂15g水1000ml，pH7.4加入0.4%的酚红溶液6ml，分装，121℃，15min，灭菌Baird-Parker氏培养基成分胰蛋白胨10g牛肉膏5g酵母膏1g丙酮酸钠10g甘氨酸12g氯化锂5g琼脂20gPH值7.3增菌剂的配法30%的卵黄盐水50ml与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10

6、ml混合，保存于冰箱内。制作将Baird-Parker氏培养基高压灭菌并冷却至50℃，加入增菌剂5%，充分摇匀后，倾注平板。培养基应是致密不透明的，使用前在冰箱内储存不得超过48h。金黄色葡萄球菌在Baird-Parker氏培养基上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在外层有一透明带。检样：25g（ml）+225ml灭菌生理盐水直接记数方法增菌培养方法Baird-Parker平板0.3ml、0.3ml、0.4ml7.5%氯化钠肉糖或胰酪胨大豆肉汤血平板血平板，Baird-P

7、arker平板涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报告37℃24h37℃24h分离程序增菌及分离培养吸取5ml上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50ml培养基内，培养24h。再转种于血平板和Baird-Parker平板，培养24h，挑取血平板上呈金黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。胰酪胨大豆肉汤胰酪胨（或胰蛋白胨）17g植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）3g氯化钠100g磷酸氢二钾2.5g葡萄糖2.5g蒸馏水1000mlpH值7.3，121℃，15min血浆凝固酶试验试管法吸取1：4稀释的新鲜兔血

8、浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，震荡混匀，置37℃，每30min观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置，呈现凝块者，为阳性结果。玻片法通常用于检测葡萄球菌胞壁上的凝集因子。取未稀释的兔血浆及生理盐水各一滴，分别放于洁净玻片