蜂胶总黄酮对大鼠急性放射性肠损伤的保护作用及对p38mapk途径的影响

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1、蜂胶总黄酮对大鼠急性放射性肠损伤的保护作用及对P38MAPK途径的影响余磊1唐巧云1楚建军2(1江苏大学附属人民医院肿瘤科210029)(2无锡市第四人民医院肿瘤科214062)【摘要】目的：研究蜂胶总黄酮对人鼠肠道放射损伤的保护作用以及对P38丝裂原活化蛋白激酶途径的影响。方法：50只大鼠随机分为5组：正常对照组，模型组，总黄酮高低剂量组(200ml/kg/d,100/kg/d),N-乙酰半胱氨酸组，除正常对照组外其余各组给药后第4天予6MVX线单次腹部照射9Gy,照射后3d处死大鼠取材，原位末端标记法检测肠黏膜凋亡，酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α含量，

2、蛋白印迹法检测P38MAPK的表达情况。结果：模型建立成功：模型组TUNEL法肠黏膜凋亡明显增多，P38MAPK活化和TNF-α表达亦明显增加(P<0.05);与单纯照射组相比，蜂胶总黄酮组肠黏膜凋亡减少及P38MAPK活化受到抑制，TNF-α表达减少，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：蜂胶总黄酮对大鼠急性放射性肠损伤有一定保护作用，其机制可能与一定程度抑制P38MAPK激活，减少TNF-α表达有关。【关键词】蜂胶总黄酮放射性肠损伤急性细胞凋亡P38丝裂原活化蛋白激酶刖1癌坏死因子-α【屮图分类号】R453【文献标

3、识码】A【文章编号】2095-1752(2014)24-0092-02盆腹腔肿瘤放疗的患者常易并发急性放射性肠损伤，一旦发生不仅极人限制丫放疗正常进行，且严重影响患者生存率和生活质量，给患者带来极人痛苦。目前机制不完全清楚，尚无有效治疗措施。蜂胶具有抗炎，抗辐射，抗氧化，淸除白由基的作用，其主要有效成分是总黄酮，有报道黄酮对缺血再灌注肠损伤有保护作用[1],但在放射性肠损伤方面的研宄报道较少。本文拟建立大鼠放射性肠损伤模型，通过总黄酮干预研究其保护作用以及相关机制，以期为临床防治放射性肠损伤提供新的策略和思路。i.材料与方法1.1试验动物及材料：健康清洁级成年雄性SD大鼠50只，

4、体重220-260g,（江苏省无锡市血吸虫病防治研宄所提供，动物合格证号：苏BKS2007-003）,TNF-α试剂盒（南京凯基生物科技冇限公司产品），兔抗鼠总P38MAPK及磷酸化P38MAPK多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司产品），N-乙酰半胱氨酸（美国sigma公司产品），-80°C冰箱（日本三洋MDF-382E）,紫外分光光度计（美国Beckman公司），医用电子直线加速器（美国Zarian2300CD23EX）。1.2实验动物分组：将健康清洁级成年SD大鼠50只，在清洁动物房内用标准饲料适应性喂养3天，温度18〜22°C,湿度50%，普通光照6:00

5、—18:00，自由饮水，观察大鼠无不良反应，进食饮水活动正常。随机分为五组：C组正常对照组（n=10）:未作腹部照射；R组单纯照射组（n=10）:仅接受单次腹部照射。T1组总黄酮高剂量组（n=10）,灌服总黄酮200mg/kg/d连续7天+单次腹部照射。T2组总黄酮低剂量组（n=10）,灌服总黄酮100mg/kg/d连续7天+单次腹部照射。N组NAC组设为阳性对照（n=10）,灌服N-乙酰半胱氨酸200mg/kg/d连续7天+单次腹部照射。1.3模型的建立及取材:给药后第4天，将实验大鼠（除对照组外）禁食12h,不禁水，逐一称重后用10%水合氯醛按3.5ml/kg腹腔注射麻醉，固

6、定在特制奋机玻璃板上，医用直线加速器予6MVX线单次腹部照射9GY，剂量率4.5GY/min,照射时间2min,照射范围为剑突至耻骨联合，照射面积8.5cm*5.5cm，源皮距（SSD）=100cm。照射完毕将大鼠放回笼内待其苏醒，自由活动及饮水。所有大鼠照射后第3天禁食12h处死动物取材。1.4检测指标：1.4.1原位末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡：取冋肠组织中性甲醛固定，石蜡包埋，切片，脱蜡脱水，严格按照说明书操作，封片，置于荧光显微镜下观察凋亡细胞（绿色荧光颗粒为阳性细胞，即凋亡细胞），在高倍镜下（×400）每张切片随机选取5个视野计算凋亡指数(apopt

7、osisindex,AI),么1=凋亡细胞/总细胞数×100%,5个视野下的平均值代表每张切片的实际AI。1.4.2酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α含量：人鼠麻醉后用EDTA抗凝管心脏取血2ml,2000rpm离心10分钟后取上层血浆，分装后置于-80°C冰箱保存，严格按照TNF-α试剂盒操作说明书测定。1.4.3蛋白印迹法(westernblotting)测定P38MAPK磯酸化表达:按照试剂盒说明书分别提取小肠组织匀浆液中的细胞浆