灰葡萄孢菌aur1基因对细胞生长和繁殖影响

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1、灰葡萄孢菌AUR1基因对细胞生长和繁殖的影响赵红霞,孙九丽,苟萍*(新疆大学生命科学与技术学院,新疆乌鲁木齐830046)摘要：目的:明确灰葡萄孢菌AUR1基因（BcAUR1）对灰葡萄孢菌细胞生长、发育和繁殖的作用。方法:采用PCR扩增BcAUR1的P和T片段，依次克隆于pTFCM质粒载体的潮霉素基因两侧，构建灰葡萄孢菌AUR1断裂基因表达载体，通过农杆菌介导转化灰葡萄孢菌，在潮霉素抗性培养基上筛选转化子。AbA处理灰葡萄孢菌，观察细胞形态。结果:断裂基因转化子比空载转化子显著减少，说明BcAUR1断裂基因同源重组替代了

2、宿主AUR1基因，导致转化子不能存活。AbA显著影响野生型灰葡萄孢菌的生长发育，导致孢子萌发延迟、菌丝形态异常，不能形成分生孢子头；但AbA不影响抗AbA突变体BcAUR1a的生长发育。结论：AUR1基因对灰葡萄孢菌生长、发育和繁殖起重要作用。关键词：灰葡萄孢菌,IPC合成酶,短梗霉素A,同源重组，转化子中图分类号：S188+．2文献标识码：AEffectsofBotrytiscinereaAUR1geneoncellgrowthandreproductionZHAOHong-xia,GOUPing*(Collegeof

3、LifeandTechnology,XinjiangUniversity,Urumqi830046,China)Abstract:Objective:ToinvestigatetheinfluenceofAUR1geneonBotrytiscinereacellgrowthandreproduction.Method:BcAUR1PfragmentandTfragmentwereamplifidedbyPCR,clonedintobothsidesofhygromycingeneofplasmidvectorpTFCMb

4、ysequence.ThevectorwastransformedintoB.cinereabyagrobacterium-mediatedgenetictransformationmethodandthetransformantswerescreenedbyhygromycinresistance.B.cinereawastreatedbyAbAandcellmorphologywasobserved.Result:Theinterruptedgenetransformantswereobviouslylesstha

5、nemptyplasmidtransformants,indicatingthatBcAUR1interruptedgenehadbeenhomologousrecombinantionintoB.cinerea’sgenome,causingB.cinereanotsurvive.Besides,AbAcouldinhibitthegrowthofwildB.cinereaobviously,delaysporegermination,induceabnormalofmycelialmorphology,blockth

6、eformationofconidiumhead.However,AbAdidnotaffectthegrowthofAbA-resistantmutantBcAUR1a.Conclusion:AUR1geneplaysakeyroleinB.cinereacellgrowthandreproduction.Keywords:Botrytiscinerea,IPCsynthaseenzyme,aureobasidinA,homologousrecombination,transformantsa基金项目：国家自然科学基金

7、项目(31160031)作者简介：赵红霞（1987—），女，甘肃定西市人，硕士研究生，专业方向：生物化学与分子生物学.(E-mail)zhaohongxiazyn@sina.com通讯作者：苟萍(1955—)，女，新疆乌鲁木齐人，教授，硕士生导师，研究方向：生物化学与分子生物学．(E-mail)gou__ping@sina.com0引言鞘脂普遍存在于各种动、植物细胞的细胞膜、细胞器膜、富脂器官和载脂蛋白中，在质膜中的含量尤为丰富，鞘脂是维持真核细胞结构不可缺少的组分。近年来发现鞘脂及其代谢产物还是重要的信号分子,在细胞的

8、生长、凋亡、分化、衰老等细胞基本活动过程中发挥重要的调节作用。在人类致病真菌中，鞘脂与致病性相关的信号传导有密切的关系。丝状真菌中的鞘脂还与孢子萌发、菌丝的极性生长相关[1-3]。AUR1基因编码的肌醇磷脂酰神经酰胺（IPC）合成酶是真菌鞘脂代谢的关键酶，该酶催化真菌中的特有反应——神经酰胺和磷脂酰肌醇生成IPC和甘