基于chd基因序列分析的帝企鹅性别鉴定研究

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1、于CHD基因序列分析的帝企鹅性别鉴定研究沈玮，潘少坤，罗红梅，刘伟，朱标，曹祥荣3滴京师范大学生命科学学院，江苏南京210046)摘要［目的份析帝企鹅(Aptenodytesfasten)CW基因序列•以鉴定性S“［方法保用苯酚氯仿抽提法提取6只未知性g啲帝企鹅血液中的基因组DNA，运用P2/P8弓

2、物护增CHZ)基因片段，将PCR产物克隆SIT2/ecton利用NCBI的Blast程序.以趾鹰(CinaetiisSaf2/.)同源序列为比对参照，将帝企鹅CW基因片段序列与GenBank中的基因片段序列进行同源性比较分析，鉴定帝企鹅的性别。［结

3、果测序结果表明，CW2Z?卩CW灰基因的PCR产物大小分别为378、387bp雌雄结果并不明显.不易区分开来。Blast比对结果表明，帝企鹅LD、EK.ZF为雄注，帝企鹅DG,YA、YY为雌注。［结论結合PCR扩增和测序分析CW基因，是单态性鸟类性别鉴定的有效和准确的方法。关键词帝企鹅；0/0基因@峙;性SU鉴定中图分类号S835文献标识码A文章编号0517-6611(2010)03-01167-02StudyonSexIdcntfficatbnofEmperorPenguh(Aptenodytesforsteri)BasedonSequenc

4、eAnalysisoftheCHDGeneSHENWeietaI(CollegeofLifeSciences,NanjingNoimalUniversity，Nanjing,Jiangsu210046)Abstract[Objective]TheresearchahiedIoanalyzetheCHDgenesequenceofEmperorPenguin(Aptenodytesfo^teri)K)identifyitssex[Method]ThegeneticDNAwasextractedfromthebloodof6Aforsteriwhi

5、chsexwasunknownThePCRamplifiedfragnentswithprinersP2/P8wereclonedinSectorTakinghomologoussequenceofCinaetusgallieusasreference,theCHDgenesequencewascomparedlothehoinok)guesinGenBankk)identifyitssexIResultJThesequencingresultsshowedthatthePCRproductsofCHD-ZandCHD-Wwere378、387

6、bprespectively，andsexcharacterwasnotsignificantfordividingsexTheBlastcomparativeresultsshowedthatAforsteriLD,EKandZFwasmale,andAfonteriDG?YAandYYwasfemale[Conclusion】ThemethodofcombiningPCRamplificationandsequencingioanalyzetheCHDgeneisanaccurateandreliablewayiodetenninesexo

7、fmonomoiphicavian.KeywordsEmpeiorPenguin(Aptenodytesforsteri);CHDgene;Sequencing;Sexidentification皇帝企鹅(Aptenodytesforsteri)，简称帝企鹅EmpeiorPen2guin,是现存企鹅家族中个体最大的.是企鹅世界中的巨人。帝企鹅在分类学上属企鹅目企鹅科王企鹅属.它是一种单态性鸟.其性别(尤其是在幼鸟时期)无论是从外观上还是行为上都很难作出判别，在人工养殖时，给配对造成了很大的困难。帝企鹅是世界上濒临灭绝的企鹅之一，并且目前对它的研

8、究尚很少。随着其个体数量的急剧下降.为了保存该物种，对其进行行为生态学的研究展得尤为重要。而性别鉴定又是考察其性别差异、性行为及繁殖特征的首要前提，对于笼养的企鹅而言.成功地鉴定住SU还可以人为地大大提高繁殖率⑴。目前，传统的对单态性鸟性别的鉴定方法有:目测性器官:通过组织培养进行染色体分析;测定粪便中雌激素与睾酮的比例:对性腺进行直接造影的内窥镜及超声波检查;体尺测量法用录音机录下鸣叫声比较声波频率等121。鸟类的性染色体为2W型,雄性为ZZ.雌性为2W。目前.利用PCR技术扩增性别相关基因的特定基因片段已经开始应用到对单态性鸟的性别鉴定中，

9、与传统的方法相比.这种方法既避免了解剖观察性器官造成的鸟类的死亡.也克服了制作染色体样本的高难度131。目前，对于非平胸鸟类来说，应用最多的是CHD基