高效液相色谱法用于有机农药残留的分离与定量分析

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1、华南师范大学实验报告学生姓名学号实验时间年级指导老师组别实验六：高效液相色谱法用于有机农药残留的分离与定量分析一、实验目的：1、应用高效液相色谱法对磺胺类抗生素的定性和定量检测2、学4谱图和数据的处理方法二、实验原理：磺胺族抗生素包括磺胺嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺甲噁唑，等，被广泛应用到水产、畜禽类养殖中。它们被添加到动物饲料中，以促进动物的生长以及防治各种疾病，如果不能严格控制停药期，很容易造成在动物肉和组织中残留，给人体健康带来危害，因此世界各W对畜禽肉中的磺胺族残留都有严格的限量耍求。GB/T5009.

2、116-2003用液相色谱法检测畜禽肉中的磺胺类药物残留量，操作简单快速，但是该方法灵敏度比较低。高效液相色谱采用液体作为流动相，由于样品溶液中的各组分在色谱柱中固定相和流动相中的分配系数不同，当试样随流动相进入色谱柱后，组分就在两相间进行反复多次的分配，由于hM定相对各种组分的吸附能力不同，各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定柱长后彼此分离，依次从色谱柱流出，达到分离、分析及测定的目的。从色谱柱屮流出的成分通过检测器时样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。三、实验仪器与试剂：仪

3、器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱试剂：磺胺嘧啶标准溶液，磺胺毗啶标准溶液，磺胺嘧啶-磺胺毗啶混合液（1:1），乙腈（AR）,0.05%甲酸溶液样品的配制：0.05%甲酸溶液：取0.25ml的甲酸标准溶液用去离子水定容至500ml的容量瓶中。磺胺嘧啶标准溶液与磺胺毗啶标准溶液：分别称取0.10g的磺胺嘧啶、磺胺毗啶用甲醇定容至100.0mL，用0.45Pm滤膜过滤（先在一次性注射器加上0.45Mm滤膜，然后把活塞杆拉出来，把要过滤的溶液倒进去再把杆推进滤出溶

4、液。）得到磺胺嘧啶和磺胺毗啶的分别为1mg/mL（lOOOppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺毗啶标准溶液各5mL，置于10mL容量瓶中磺胺毗啶和磺胺嘧啶-磺胺毗啶混合0.5mg/mL（500ppm）U!1、准备1.1准备所需的流动相，用合适的0.45um滤膜过滤，超声脱气20min。（这里用的是流动相是乙腈（B）和0.05%甲酸溶液（A），分别用有机相系和水相系的0.45Pm滤膜过滤，超声脱气20min。）1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。1.3配制样品浓度为lOOOppm（也可在

5、平衡系统时配制），用合适的0.45um滤膜过滤。（即分别称取0.10g的磺胺嘧啶、磺胺毗啶用甲醇定容至100.0mL,用0.45Mm滤膜过滤（先在一次性注射器加上0.45Pm滤膜，然后把活塞杆拉出來，把要过滤的溶液倒进去再把杆推进滤出溶液。）得到磺胺嘧啶和磺胺毗啶的分別为1mg/mL（lOOOppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺毗啶标淮溶液各5mL，置于10mL容量瓶屮磺胺毗啶和磺胺嘧啶-磺胺毗啶混合0.5mg/mL（500ppm）。2、开机接通电源，依次开启不间断电源、B聚、A聚、检测器，待泵和检测器自检结束

6、后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站（即电脑桌面上的CS-LightRealTimeAnalysis）o3、参数设定3.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按［fund键接着按［Enter］键，用数字键输入所需波长值281nmo3.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按［fimc］键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1.0mL/min）。3.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按［ccmc］键，用数字键输入流动相B乙腈的浓度百分数（20%）。4、更换流动相并排气泡4.1将A/

7、B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶屮；4.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；4.3按A/B泵的［purge］键，pump指示灯亮，泉大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；4.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。5、进样5.1进样前在CS-LightRealTimeAnalysis中:（1）点击“单次分析”，接着点击“样品记录”，在样品记录名称中输入所要检测得样品名称，然后点击“数据文件”选择该样品储存在哪里，最后在“数据储存的文件夹”后面输入该样品名称

8、，点击确定。（2）在信号采集菜单屮设定停止时间和延迟时间。5.2进样前按检测器［zero］键调零，按软件中［零点校正］按钮校正基线零点，再按一下［查看基线］按钮使其弹起。5.3用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取20（IL。7、数据处理7.1在桌面双击“CS-LightPostrumAnalysis”，点击确定按钮后，在“文件夹S录中”选中该样品记录双击鼠标，在谱图上单击鼠标右键的“显示设置”，在“显示设置”中