谈血小板-t细胞活化抗原1

《谈血小板-t细胞活化抗原1》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、谈血小板/T细胞活化抗原1　1985年Burns等以活化T细胞为免疫原制备了抗活化T细胞表面抗原的单克隆抗体，并将其中1株单克隆抗体Leo-A1识别的抗原命名为人T细胞系特异性活化抗原1（Tlineage-specificactivationantigen1,TLiSA1），实验证实TLiSA1参和了CTL细胞的活化和分化〔1-3〕。随后的实验发现TLiSA1也高表达于血小板表面，并和血小板的活化和凝集功能有关，遂将此抗原重新命名为血小板/T细胞活化抗原1（plateletandTcellactivationanti

2、gen1,PTA1）〔4〕。1997年我实验室和澳大利亚Neolecular-1,DNAM-1）序列相同。DNAM-1分子的发现过程同PTA1十分相似，最初作者制备针对人CTL的单抗，发现其中DX11单抗能明显抑制CTL对多种肿瘤细胞系(如Colo205、PA-1、MCF7等)的杀伤功能。Shibuya等首先从外周血单个核细胞(PBMC)中通过DX11单抗亲和层析纯化了DX11识别的抗原，进行了部分蛋白序列测定，以多肽对应的PCR引物扩增出DNAM-1的部分片段，再以32P标记的探针进行筛选，最终获得了DNAM-1的

3、cDNA序列。Shibuya认为DNAM-1分子是一种新的粘附分子，并可能和信号转导有关〔6〕。　　到目前为止，PTA1的配体（PTA1ligand,PTA1L）尚未基因克隆成功。本实验室已成功构建、表达了PTA1胞膜外区/IgG1Fc段融合蛋白，通过PTA1/Ig融合蛋白进行的免疫组化及粘附阻断实验证实PTA1配体表达于肿瘤细胞系Colo205细胞膜表面。PTA1配体的鉴定正在进行之中。　　PTA1的基因及结构　　1997年Sherrington等从以pCDM8为载体的活化Jurkat细胞cDNA文库中，通过Leo

4、-A1单抗panning的方法筛选得到人PTA1阳性克隆〔5〕。人PTA1基因为单拷贝基因，定位于染色体18q22-q23。其cDNA全长1.4kb，5?和3?端分别有174bp和111bp非编码区。开放读框1　011bp，编码336个氨基酸，包括18个疏水氨基酸的信号肽，成熟蛋白由318个氨基酸组成，属I型跨膜糖蛋白。胞膜外区由232个氨基酸组成，形成2个免疫球蛋白超家族V样结构域，这种结构在免疫球蛋白超家族成员中是唯一的一个。PTA1分子第19和90位的保守半胱氨酸形成链内二硫键，第134和204位的保守半胱氨酸

5、形成第二个链内二硫键，这2个二硫键分别起到稳定胞膜外区2个结构域的功能。在90位和204位半胱氨酸处均存在免疫球蛋白超家族V样结构域的特征性基序Asp-X（Gly或Ala）-X-Try-X-Cys基序。PTA1胞膜外区含有8个潜在的N-糖基化位点和3个潜在的O-糖基化位点。当用内切糖苷酶（EndoF）消化N-连接的糖基后，PTA1的相对分子质量减小了30103，表明PTA1分子胞膜外区是高度糖基化的，这可能和PTA1参和分子识别有关。PTA1的糖基中含有大量的唾液酸，神经氨酸酶（neuraminidase）消化唾液酸

6、后，其pI由3.5～4.2转变为7.8～8.2。PTA1穿膜区由25个疏水氨基酸组成。胞浆区有61个氨基酸，含有3个酪氨酸、6个丝氨酸和6个苏氨酸，胞浆区尾部含有一段EDIYVNY基序，中心酪氨酸的氨基端有2个带负电荷的谷氨酸和天冬氨酸（ED），羧基端为缬氨酸、天冬酰胺和酪氨酸（VNY），此基序可作为非受体型蛋白酪氨酸激酶（proteintyrosinekinase,PTK）的底物。并可以和蛋白酪氨酸磷酸酶2（proteintyrosinephosphatase2,PTP2）氨基端的SH2结构域结合。另外，在PTA1

7、胞浆区还存在着酪蛋白激酶Ⅱ（caseinkinaseⅡ）和PKC功能的底物S/T结构。胞浆区的上述结构和基序提示PTA1分子可能参和T细胞和血小板活化的信号转导过程〔4，5〕。人、猿、猴PTA1分子cDNA及蛋白水平的同源性为93%～95%，表明PTA1在生物进化过程中高度保守并可能具有重要的功能。　　Burns等通过Leo-A1单抗亲和层析的方法从血小板上纯化了PTA1分子，并进行了蛋白部分序列测定，证实PTA1分子为一全新的分子。通过纯化的PTA1分子再次免疫制备了抗PTA1的单克隆抗体NEA刺激的Jurkat细

8、胞膜表面，并且平均荧光强度相同，但NEA刺激的Jurkat细胞膜表面着色，当增加Jurkat细胞膜通透性后，NEA刺激的Jurkat细胞及血小板胞膜，再用磷酸肌醇磷脂酶C（phosphatidylinositolphospholipaseC）处理细胞，然后在Jurkat细胞上清中可以检测到从细胞膜上释放的PTA1抗原，表明PTA1分子至少是部分