水通道蛋白0，1在stz

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1、水通道蛋白0，1在STZ【摘要】目的研究水通道蛋白0，1(AQP0、AQP1)在链脲佐菌素(STZ)-糖尿病性白内障发病机制中的作用。方法将40只SD大鼠随机分为对照组与糖尿病性白内障组2组，用STZ腹腔注射诱发糖尿病性白内障，每周观察晶状体的变化。分别于实验开始后2，8周末摘取眼球，采用免疫组织化学染色技术检测AQP0及AQP1在晶状体中的表达，各检测10只大鼠20眼。结果对照组晶状体保持透明，糖尿病性白内障晶状体在2周末出现空泡，8周末完全混浊。AQP0及AQP1在对照组中阳性表达，糖尿病性白内障组2周表达较对照组强，组间差别具有统计学意义(AQP0：t2周末=3.59

2、8，P=0.001;AQP1：t2周末=3.103，P=0.004);糖尿病性白内障组8周表达较对照组弱，组间差别具有统计学意义(AQP0：t8周末=6.994，P<0.001;AQP1：t8周末=4.475，P<0.001)。结论AQP0及AQP1表达异常与糖尿病性白内障的发生、发展有关。【关键词】水孔蛋白类;链脲菌素;免疫组织化学;白内障;糖尿病并发症糖尿病性白内障是严重的致盲性眼病，进展较快，常常双眼同时发病。水通道蛋白(aquaporin,AQP)在眼部广泛分布，有效的水转运对维持眼的正常功能是必需的。晶状体细胞表达的AQP维持晶状体的脱水状态、透明性。

3、本实验通过免疫组织化学技术检测AQP0及AQP1在糖尿病性白内障的表达及分布，探讨其在链脲佐菌素(STZ)-糖尿病性白内障发病机制中的作用。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物SD大鼠40只，雌雄不限，体质量(150±5)g，购自福建医科大学实验动物中心[动物合格证号：SCXKC(闽)20040009]。随机分为2组：对照组与糖尿病性白内障组。　　1.1.2主要试剂与仪器STZ(美国Sigma公司);兔抗鼠AQP0，兔抗鼠AQP1单克隆抗体(美国SantaCruz公司)，SP试剂盒(北京中杉公司)。Olympus显微镜(BH-2型，日本Olympus公司);微量

4、快速血糖仪器(ONETOUCHII型，美国强生医疗器材公司);HPLAS～1000高清晰彩色图像细胞测量系统(武汉同济千屏影像公司)。　　1.2方法　　1.2.1制作动物模型大鼠禁食12h，对照组一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液(0.1mol/L，pH4.5);糖尿病性白内障组一次性腹腔注射2%STZ溶液(临用时以0.1mol/L、pH4.5的柠檬酸缓冲液配置)，剂量为70mg/kg。3d后于大鼠尾静脉采血测血糖浓度，排除血糖<16.7mmol/L的大鼠。　　1.2.2观测指标及方法注射后，每周裂隙灯下观察晶状体变化1次，每2周监测血糖1次。在实验开始后2周末及8周末，对照

5、组和糖尿病性白内障组各取动物10只(20只眼)，常规摘取眼球。将取出的眼球立即分别用10%中性福尔马林液固定，石腊包埋切片(0.3μm)，行免疫组织化学SP二步法检测晶状体中AQP0及AQP1的表达，以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。　　1.2.3结果判断AQP0及AQP1抗原以细胞膜和细胞质出现棕黄色颗粒为阳性反应。采用HPLAS-2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对AQP0及AQP1的表达进行定量分析，每个标本随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400)，测定每个视野下阳性反应的平均光密度，以5个视野的平均光密度的平均值作为测量值。　　1.3统计学处理数据以

6、x±s表示，采用SPSS12.0软件包进行统计处理，组间比较采用成组t检验，以P<0.05表示差别有统计学意义。　　2结果　　2.1裂隙灯观察实验过程中对照组大鼠晶状体全部透明;糖尿病性白内障组约于第2周末在晶状体周边部见到空泡，第4周末见到絮状混浊，第8周末完全混浊。　　2.2AQP0及AQP1在晶状体中的表达对照组晶状体纤维可见AQP0棕黄色阳性表达;糖尿病性白内障组2周中晶状体纤维AQP0表达较对照组强;糖尿病性白内障组8周中晶状体纤维AQP0表达较对照组弱，组间差别均有统计学意义(AQP0：t2周末=3.598，P=0.001;t8周末=6.994，P<

7、0.001;图1～2)。晶状体上皮细胞中可见到AQP1棕黄色阳性表达;糖尿病性白内障组2周中晶状体上皮细胞AQP1表达较对照组强;糖尿病性白内障组8周中晶状体上皮细胞AQP1表达较对照组弱，组间差别均有统计学意义(AQP1：t2周末=3.103，P=0.004;t8周末=4.475，P<0.001;图1～2)。　　免疫组织化学SP法，DAB染色，苏木素复染，×400.A、A1：阴性对照;B、B1：对照组;C、C1：糖尿病性白内障组2周;D、D1：糖尿病性白内障组8周.A～D为AQP0;A1～D1为AQP1.