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时间:2018-11-19
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1、新西兰兔脊髓内水通道蛋白作者:孙国柱,张庆俊,赵宗茂,张更申,王浩【关键词】水孔蛋白 Expressionanddistributionofaquaporin4inspinalcordofNeinetheexpressionanddistributionofaquaporin4(AQP4)innormalspinalcordofrabbits,soastoprovidetheoreticalbasisfortheroleofAQP4inspinalmunohistochemistryandinsituhybridizationedonspinalparaffinsectionsf
2、romhealthyadultrabbitstodetecttheexpressionanddistributionofAQP4protEinandmRNA.RESULTS:Thepositivecellsmostlyincludedependymalcellsofmyelocoele,glialcells,anteriorhornmotorneurons,andepithelialcellsofspinalpiamaterandthEIrexpressionsainlylocatedoncellmembrane.Interestingly,AQP4distributioningl
3、ialcellsandependymalcellsshoerainlyinthemembranesidecontactingostlyinthebasolateralmembraneofependymalcells.CONCLUSION:AQP4isicallocationssuggesttheAQP4maybeinvolvedinspinalcordetabolism,evencanbelocallyregulatedtomeetspecialfunctionalrequest. 【Keymunohistochemistry;insituhybridization 【摘要】目
4、的:探讨正常新西兰大白兔脊髓水通道蛋白4(AQP4)的定位与表达,为研究其在脊髓水代谢中的作用提供理论基础.方法:选用正常成年新西兰大白兔,采用免疫组化和原位杂交技术检测脊髓AQP4蛋白及其mRNA的定位及表达.结果:免疫组织化学染色和原位杂交结果显示胶质细胞、前角运动神经元、中央管室管膜细胞、软脊膜上皮细胞均表达阳性,AQP4主要分布于细胞膜,其中,胶质细胞和中央管室管膜细胞表达存在极性,前者主要分布在与毛细血管内皮细胞接触的一侧,后者主要分布在中央管室管膜细胞的基底侧膜.结论:AQP4在正常兔脊髓内具有广泛的表达,其表达的解剖定位提示AQP4在脊髓内主要参与水分子的转运及平衡调
5、节、电解质代谢,并受局部调节以适应特殊的功能需求. 【关键词】水孔蛋白4;兔;脊髓;免疫组织化学;原位杂交 0引言 水通道蛋白(aquaporin,AQP)是一种疏水性膜蛋白家族,自1988年第一个AQP被发现[1]并于1997年正式命名为AQP1以来,目前已经发现11种之多.AQP广泛存在于动、植物的细胞膜上,介导调节水分子的跨膜转运[2-3].其中,AQP4在中枢神经系统表达最为丰富,研究证实其在脑内主要分布于星形胶质细胞、软脑膜、室管膜、脉络丛以及下丘脑的视上核和室旁核等部位,参与了水分子的转运及平衡调节(如脑脊液的生成、重吸收)、电解质代谢和内分泌活动[4].但有关A
6、QP4在脊髓的定位、表达和功能的研究有限,特别是在正常新西兰大白兔脊髓的分布少见报道.为此,我们应用免疫组化和原位杂交技术研究AQP4在新西兰大白兔脊髓的定位,推测其可能的生理功能,并为AQP4在脊髓病态的表达提供有益的对比资料. 1材料和方法 1.1材料成年健康新西兰大白兔6只(河北医科大学实验动物中心),雌雄各3只,体质量1.5~2.0kg.一抗为鼠抗AQP4多克隆抗体(1∶200,Sigma公司).SABC免疫组化试剂盒(北京中山金桥生物技术有限公司).AQP4原位杂交检测试剂盒(武汉博士德公司). 1.2方法 1.2.1标本的制备在氯胺酮过度麻醉下剪开动物胸腔,经心
7、脏灌注生理盐水500mL至流出液清亮后给予灌注40g/L多聚甲醛PBS缓冲液(pH7.3)500mL.先快后慢,灌注固定后经后正中切口、咬除棘突和椎弓根,取颈、胸、腰段脊髓各2小段,其中各脊髓节段1小段置入相同固定液中后固定24h用于免疫组化,剩余各脊髓节段置入相同固定液中后固定2h用于原位杂交.后固定成功后用蒸馏水清洗12h,逐级梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、4μm切片并裱于经10g/L多聚赖氨酸处理的清洁载玻片,用于免疫组织化学和原位杂交检测. 1.2.2
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