略论高聚金葡素活化淋巴细胞抗肺癌功能

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1、略论高聚金葡素活化淋巴细胞抗肺癌功能：徐修礼，张建芳，刘宝瑞，于文彬，马越云，苏明权，刘家云【高聚金葡素　　:高聚金葡素;肺癌;免疫治疗　　0引言　　高聚金葡素（highagglomerativestaphylococcin，HAS）是由沈阳协合团体开发的一种新型超抗原抗癌生物制剂，我们用HAS体外刺激淋巴细胞，并观察此淋巴细胞在体外和***鼠体内对肺癌生长的抑制情况，获得较好的效果.　　1材料和方法　　1.1材料　　HAS由沈阳协和团体馈赠;酶联免疫检测仪为Labsystem产品;抗CD14/抗CD45，抗CD3/抗CD56双色荧光标记抗体由本院免疫科提供.肺癌A549细胞为本校

2、基础部免疫学教研室提供;乳腺癌MCF-7细胞引自军事医学科学院;大肠癌moser细胞、肺癌GLC-82细胞为本室保存株.***鼠由本校实验动物中心提供，3～4周龄，体质量18～22g.　　1.2方法　　常规分离外周血单个核细胞，用含100mLL-1FCS的1640悬浮，以每孔5×106个细胞加进6孔板，37℃，50mLL-1CO2环境下贴壁2h，用预热的培养液轻轻洗出非贴壁细胞，调浓度至5×109L-1，加HAS2500UL-1，37℃，50mLL-1CO2条件下培养，每4d换液，即为HASL.HASL培养0和10d分别用抗CD14/抗CD45、抗CD3/抗CD56双色荧光染色后用

3、流式细胞仪分析.以HASL为效应细胞，A549，GLC-82，moser和MCF-7为靶细胞，效靶比为101，每组3个复孔，置37℃，50mLL-1CO2孵箱中培养16h，MTT显色，测各孔490nm吸光度（A）值.杀伤率计算如下:杀伤率=（1-试验孔A-效应细胞A靶细胞A）×100%荷瘤***鼠的抑瘤实验:***鼠股部皮下接种GLC-82细胞5×105个，随机分为对照组和HASL治疗组.接种瘤后4，10和15d向治疗组肿瘤局部注射0.2mL1×107个HASL细胞，对照组注射0.2mL生理盐水.定期观察肿瘤生长状况.　　2结果　　培养10d的HASL中CD3CD56双阳性细胞占2

4、1%，高表达CD45，CD14阳性率低于10%.MTT试验表明，HASL对GLC-82，A549，moser和MCF-7具有不同程度杀伤功能，杀伤率分别为63%，48%，60%和45%.在预实验中证实，***鼠皮下接种GLC-82细胞5×105个后4d即可见肿瘤生长，20d肿瘤体积约可达300mm3，肿瘤发生率为100%.在实验中，经过3次免疫细胞治疗，至20d结束实验，丈量各组肿瘤体积并杀鼠取瘤称质量，结果见表1.表1HASL治疗对GLC-82荷瘤***鼠的抑瘤功能（略）　　3讨论　　文献证实HAS对T细胞具有强大的刺激功能，并能增强NK细胞活性［3］.在本实验中，外周血淋巴细胞

5、经高聚金葡素刺激后，CD3CD56双阳性细胞占21%.该类细胞属T细胞，但表达NK细胞标志，体外杀瘤活性介于CD3CD56-T细胞和CD3-CD56NK细胞之间，其细胞毒活性不具有MHC限制性［4］，推测CD3CD56双阳性细胞为主要的杀瘤效应细胞.在***鼠实验中，HASL治疗组***鼠的肿瘤生长明显慢于对照组，经3次治疗后肿瘤生长抑制率达76.3%，可能是多种机制共同功能的结果.　　［4］任欢，邢淑贤，徐红薇.CIK细胞的体外增殖及体内外杀瘤活性的实验探究［J］.中国肿瘤生物治疗杂志，1999;6（1）:17-21.