舌发育异常与胎鼠地塞米松腭裂的关系

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1、舌发育异常与胎鼠地塞米松腭裂的关系【关键词】腭裂;小鼠;地塞米松；舌肌；bcl2小鼠腭裂的形成受多方面因素的影响，其中胎鼠腭发育的异常、舌发育的异常等均参与了腭裂的形成过程。其中胎鼠腭发育的异常我们已研究过[1,2]，本实验重点探讨舌的发育过程及其发育异常对腭裂形成的影响。1材料与方法1.1实验试剂与器械试剂：醋酸地塞米松、Bouins固定液、苏木精—伊红染液、兔bcl2多克隆抗体、即用型SABC免疫组化试剂盒（武汉博士德生物有限公司）。仪器：OLYNPUSCX31，Motic6.0医学图像分析系统。1.2实验动物与方

2、法健康成年未生育昆明小鼠，体重22～25g，北京大学医学部实验动物中心提供，下午6∶00雌雄2∶1合笼，次日早7∶30和下午4∶30检查阴栓，发现阴栓之日定为孕期第0天（0GD，gestationday）。所得孕鼠随机分为实验组、对照组。实验组孕鼠于11.5GD腹腔注射50mg/kg剂量的地塞米松，对照组注射等量生理盐水。各组均在13.5GD、14.5GD、15.5GD、16.5GD颈椎脱臼处死，取出胚胎，共得到胎鼠284只，其中实验组196只，对照组98只。取头Bouin's液固定，以喙部向下做定向石蜡包埋、5μm连续冠状位

3、切片。1.3染色HE染色：二甲苯脱蜡、梯度酒精、蒸馏水洗。苏木精染色5min、盐酸—酒精分化、伊红染色2min、梯度酒精脱水、二甲苯透明、封片。免疫组化染色：常规脱蜡至水；抗原修复3min；0.01mmol/LPBS液洗3min×3次；3%H2O2室温避光孵育15min；0.01mmol/LPBS液洗3min×3次；5%BSA封闭。加入bcl2（1∶100），湿盒中4℃孵育过夜。其他步骤按即用型SABC免疫组化试剂盒使用说明书进行。苏木精复染，盐酸—酒精分化、蓝化、脱水、透明、封片。光镜观察舌体高度、舌体宽度及舌黏膜厚度的变

4、化。1.4数据处理用OLYMPUSCX31显微镜连接在计算机上进行观察：各组中每只动物随机选取同一解剖平面，10倍目镜下统计测量舌体高度、舌体宽度及舌黏膜厚度，以SPSS统计软件进行ANOVA方差分析。2结果2.1舌体的形态学观察舌由表面的黏膜和深部的舌肌组成。舌肌由纵行、横行及垂直走向的骨骼肌纤维束交织构成，纵行肌所占比例最多，垂直肌次之，横行肌最少。在舌的不同生长发育阶段，舌肌的纵行、横行及垂直走行的骨骼肌纤维束组成比例不尽相同。13.5GD时舌体中央可见较多的星状、纺锤状细胞，舌肌未完全分化。正常组14.5GD时在靠近

5、舌背面侧可见到核圆形的舌肌纤维横断面，舌体开始下降；在15.5GD时舌体继续下降，双侧腭突水平相向生长；在16.5GD时舌降至口底，舌发育基本完成。实验组与正常组发育过程相似，但部分个体发育延迟（图1～2）。13.5GD时纵行肌占较大比例，14.5GD、15.5GD时垂直肌所占比例不断增加。由13.5GD到14.5GD时，舌肌细胞由密集变得稀疏，14.5GD,15.5GD,16.5GD舌肌纤维密度几乎无差别。但实验组HE染色切片中，胞浆及细胞外基质较多，染色淡，舌肌纤维粗大肥厚(图3～4)。各时期bcl2阳性信号的表达无明显

6、变化。2.2舌体变化13.5GD两组胎鼠舌体厚，呈矢状位生长；正常组14.5GD以后舌体变扁宽，而实验组则呈现不同程度的发育迟滞。实验组与对照组比较，实验组舌体高度明显高于对照组。对照组中舌体高度随孕期日的增加而逐渐降低，16.5GD时舌体已完全降至口底，与成年小鼠的舌体相似。实验组中舌体高度亦随孕期日的增加而逐渐降低，13.5GD时实验组与对照组无明显差别。实验数据经SPSS10.0软件ANOVA方差分析,结果如表1。2009年6月刘贤等：舌发育异常与胎鼠地塞米松腭裂的关系表1实验组和对照组阳性舌体高度比较注：与对照组相比*

7、P<0.05，**P<0.013讨论腭发育是一个复杂的过程，遵循一定的规律，并呈现精密的时间空间关系，包括细胞的增殖、分化、凝聚等过程，同时受其它外界与内部因素的影响。胚胎期腭突发育大致可分为五个时期：腭突发生期、垂直生长期、水平生长期、接触融合期和分化成熟期[3]。我们观察到舌发育在一定程度上影响了腭的发育，参与了腭裂的形成。本实验中的13.5GD、14.5GD分别相当于上述的腭发育的垂直生长期和水平生长期，两个时期的过渡需要经过腭的上抬，而腭的完全上抬变为水平向生长在一定程度上受舌体下降程度的影响。舌体的下降延

8、迟或不完全下降，阻碍了双侧腭突水平方向的生长，以致不能在中线区融合，最终导致腭裂的产生。我们发现13.5GD～16.5GD对照组和实验组，舌体高度均逐渐下降；在13.5GD实验组和对照组中舌的高度无明显差别，但在14.5GD～16.5GD三个时期的对照组与实验组中，舌体高度具