莲心碱对大鼠局灶性脑缺血c

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1、莲心碱对大鼠局灶性脑缺血C余万桂陈庭煊张恒文谢平张燕祥张道明刘莲邓德明【关键词】莲心碱；,,脑缺血；,,C　　摘要：目的观察莲心碱对大鼠局灶性脑缺血CFos蛋白表达的影响并探讨其保护作用机制。方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型，通过免疫组化法检测脑缺血24hCFos蛋白的表达以及经莲心碱(3mg/kg)处理后对该蛋白表达的影响。结果脑缺血24hCFos蛋白的表达明显增加，莲心碱可显著抑制脑缺血后CFos蛋白表达。结论莲心碱的神经保护机制可能与抑制CFos蛋白的表达有关。　　关键词：莲心碱；脑缺血；CFos蛋白　　　Abstract：ObjectiveTo

2、observetheeffectofliensinineonCFosproteinexpressioninRatsiaandinvestigateitsprotectivemechanism.MethodsThemodeloffocalcerebralischemiainratsadebysuture-occludedmethod,theexpressionofCFOSproteinandtheeffectofLiensinine(3mg/kg)appliedpriorischemiaontheexpressionmunohistochemicalmetho

3、daftercerebralischemia24h.ResultsTheexpressionofCFOSproteinsignificantlyincreasedafter24hischemiaandLiensininesignificantlyinhibitedtheexpressionofCFos.ConclusionTheprotectivemechanismofLiensinineisprobablyrelatedtotheinhibitionofCFOSgeneexpression.　　Keyia；CFosProtein　　CFos蛋白是凋亡相关基

4、因C-Fos的表达产物，对缺血反应敏感,可作为研究脑缺血后药物干预的指标〔1〕。莲心碱是从中药莲子心中提取分离得到的双苄基异喹啉类化合物，具有降压、抗心律失常等心血管活性〔2〕，文献报道与莲心碱同属莲子心主成分的另一生物碱─异莲心碱对实验性脑缺血损伤具有保护作用〔3〕，同时我们在实验中观察到莲心碱对脑缺血具有保护作用，但其作用机制未明。本研究通过观察莲心碱对局灶性脑缺血CFos蛋白表达的影响，探讨其对大鼠局灶性缺血性保护作用的机制。　　1材料　　1.1动物雄性SD大鼠24只，体重200~240g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供(动物中心许可证号为S

5、YXK(鄂)20040028，动物合格证号为SCXK(鄂)20040007)。　　1.2药物与试剂莲心碱由武汉大学药学院药物化学研究室提供。免疫组化试剂，兔抗CFos抗体和生物素化羊抗兔IgG购自武汉博士德公司，抗体效价1∶100。　　1.3仪器切片机，LeicaDMLB2显微镜和LeicaMPS60显微照像系统(德国Leica公司)。　　2方法　　2.1动物模型制备与分组24只雄性SD大鼠随机分为3组，分别为假手术组、缺血组、莲心碱组。参考ZeaLonga等〔4〕的方法，并稍加改良制备大脑中动脉局灶缺血模型。3组大鼠分别予以戊巴比妥钠30mg/kg，腹腔注

6、射麻醉，颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉(CCA)和颈外动脉(ECA)，5/0丝线结扎颈外动脉，分离与颈总动脉伴行的迷走神经，在距颈总动脉分叉处近端0.5～0.6cm处结扎颈总动脉，在结扎线的远端，置丝线备用，用微小动脉夹夹闭备用线远端的颈总动脉，在备用线的近端用4号半头皮针扎一小孔，将作标记5/0尼龙线栓送入切口，向上推至动脉夹处，将备用线扎紧，随即松开动脉夹，缺血组和莲心碱组将线栓沿颈总动脉、颈内动脉顺行向上插入至MCA起始部，遇阻力时停止，从颈总动脉分叉处计算插入深度1.7～1.9cm，造成大脑中动脉血供阻断。而假手术组将线栓沿颈总动脉、颈内动脉顺行向上

7、插入，插入深度仅为1cm，其余步骤同上。手术结束后莲心碱组舌静脉注射莲心碱3mg・kg1，缺血组舌静脉注射同等剂量生理盐水，假手术组不给于处理。　　2.2脑缺血体积的测量24h大鼠断头取脑，去除嗅球、小脑及低位脑干后，脑组织放于-20℃冰箱中，冷冻20min，取出后间隔3mm连续做冠状切片，置于1%TTC磷酸缓冲液中，37℃下恒温避光孵育30min，正常组织染成红色，梗塞灶染成白色，脑片置4%多聚甲醛固定，数码相机拍照，多媒体彩色病理图像分析系统进行处理，计算出大鼠的梗死灶体积和体积百分比。　　2.3CFos的免疫组化染色缺血24h后以过量的戊巴比妥(50～

8、100mg/kg)腹腔注射麻醉，开胸左心室插管，灌注