莲心碱对大鼠局灶性脑缺血c论文

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1、莲心碱对大鼠局灶性脑缺血C论文余万桂陈庭煊张恒文谢平张燕祥张道明刘莲邓德明【关键词】莲心碱；,,脑缺血；,,C摘要：目的观察莲心碱对大鼠局灶性脑缺血CFos蛋白表达的影响并探讨其保护作用机制。方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型，通过免疫组化法检测脑缺血24hCFos蛋白的表达以及经莲心碱(3mg/kg)处理后对该蛋白表达的影响。结果脑缺血24hCFos蛋白的表达明显增加，莲心碱可显著抑制脑缺血后CFos蛋白表达。结论莲心碱的神经保护机制可能与抑制CFos蛋白的表达有关。关键词：莲心碱；脑缺血；CFos蛋白Abstract：ObjectiveToobserve

2、theeffectofliensinineonCFosproteinexpressioninRatsiaandinvestigateitsprotectivemechanism.MethodsThemodeloffocalcerebralischemiainratsadebysuture-occludedmethod,theexpressionofCFOSproteinandtheeffectofLiensinine(3mg/kg)appliedpriorischemiaontheexpressionmunohistochemicalmethodaftercer

3、ebralischemia24h.ResultsTheexpressionofCFOSproteinsignificantlyincreasedafter24hischemiaandLiensininesignificantlyinhibitedtheexpressionofCFos.ConclusionTheprotectivemechanismofLiensinineisprobablyrelatedtotheinhibitionofCFOSgeneexpression.Keyia；CFosProteinCFos蛋白是凋亡相关基因C-Fos的表达产物，对缺血

4、反应敏感,可作为研究脑缺血后药物干预的指标［1］。莲心碱是从中药莲子心中提取分离得到的双苄基异喹啉类化合物，具有降压、抗心律失常等心血管活性［2］，文献报道与莲心碱同属莲子心主成分的另一生物碱―异莲心碱对实验性脑缺血损伤具有保护作用［3］，同时我们在实验中观察到莲心碱对脑缺血具有保护作用，但其作用机制未明。本研究通过观察莲心碱对局灶性脑缺血CFos蛋白表达的影响.freelg/kg，腹腔注射麻醉，颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉(CCA)和颈外动脉(ECA)，5/0丝线结扎颈外动脉，分离与颈总动脉伴行的迷走神经，在距颈总动脉分叉处近端0.5～0.6cm处结扎颈总动

5、脉，在结扎线的远端，置丝线备用，用微小动脉夹夹闭备用线远端的颈总动脉，在备用线的近端用4号半头皮针扎一小孔，将作标记5/0尼龙线栓送入切口，向上推至动脉夹处，将备用线扎紧，随即松开动脉夹，缺血组和莲心碱组将线栓沿颈总动脉、颈内动脉顺行向上插入至MCA起始部，遇阻力时停止，从颈总动脉分叉处计算插入深度1.7～1.9cm，造成大脑中动脉血供阻断。而假手术组将线栓沿颈总动脉、颈内动脉顺行向上插入，插入深度仅为1cm，其余步骤同上。手术结束后莲心碱组舌静脉注射莲心碱3mgkg1，缺血组舌静脉注射同等剂量生理盐水，假手术组不给于处理。2.2脑缺血体积的测量24h大鼠断头取

6、脑，去除嗅球、小脑及低位脑干后，脑组织放于-20℃冰箱中，冷冻20min，取出后间隔3mm连续做冠状切片，置于1%TTC磷酸缓冲液中，37℃下恒温避光孵育30min，正常组织染成红色，梗塞灶染成白色，脑片置4%多聚甲醛固定，数码相机拍照，多媒体彩色病理图像分析系统进行处理，计算出大鼠的梗死灶体积和体积百分比。2.3CFos的免疫组化染色缺血24h后以过量的戊巴比妥(50～100mg/kg)腹腔注射麻醉，开胸左心室插管，灌注肝素盐水50ml(100u/ml)，迅速剪开右心耳继续灌注4%多聚甲醛磷酸缓冲液300ml，30min开颅取脑，去除小脑和脑干，以4%多聚甲醛

7、固定，常规石蜡切片。采用ABC法检测CFos蛋白，切片常规脱腊至水，灭活内源性酶，热抗原修复滴加1∶100稀释的兔抗CFos抗体，4℃冰箱过夜；滴加生物素化羊抗兔IgG，滴加试剂SABC，DAB显色，苏木素轻度复染。2.4CFos的检测在高倍视野下(10×40)，观察缺血区，胞核有棕色颗粒者为阳性细胞，选取5个高倍视野计数阳性细胞的百分率。阳性细胞百分率=阳性细胞/(阳性细胞数+阴性细胞数)×100%。2.5统计学方法实验数据以±s表示，两样本均数比较采用t检验。3结果3.1脑缺血体积经TTC染色后，缺血组大鼠脑梗塞体积百分比为（30.25±3.42）%，与假手

8、术组比较,显著增高(P＜