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《二种菊头蝠八种组织三种同工酶研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、二种菊头蝠八种组织三种同工酶的研究王艳梅，牛红星(河南师范大学生命科学学院,河南新乡,453007)摘要：采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板活性电泳，分析了二种菊头蝠的心脏、肝脏、肾脏、胸肌、肺、胃、小肠、舌8种组织的酯酶（EST）、乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）3种同工酶的活性和分布。结果表明：二种菊头蝠8种组织的3种同工酶存在差异，其分布具有明显的组织特异性，与器官或组织所执行的功能有关。关键词：角菊头蝠；马铁菊头蝠；同工酶；电泳；组织特异性中图分类号：Q814.9文献标识码：角菊头蝠(Rhinolophuscornutus)和马铁菊头蝠(R.ferrumeq
2、uinum)同属菊头蝠科(Rhinolophidae)菊头蝠属(Rhinolophus),目前冯江等、吴毅等分别对这两个物种的回声定位、遗传学方面进行了研究[[1-5],但未见有关同工酶的报道.自从Markert于1950年代发现同工酶以来[6],同工酶的研究日益活跃,利用同工酶来探讨物种的遗传、进化和系统分类已受到人们的广泛重视[7]，国内外也对其他种类蝙蝠的同工酶进行了研究.本文采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板电泳,对角菊头蝠和马铁菊头蝠8种组织的3种同工酶进行了比较研究,以期能为探讨翼手类的分类、起源和演化提供可靠的生理生化依据,现将结果报道如下.1材料和方法1.1 材
3、料 本实验所用材料为角菊头蝠和马铁菊头蝠,♀、♂各3只，均为性成熟个体,于2005年1月采自河南省济源市.1.2 样品制备用乙醚轻度麻醉动物后,即取心脏、肝脏、肾脏、胸肌、肺、胃、小肠、舌各0.1ｇ,用冷生理盐水洗去血污后,加1ml0.01mol/Ｌ磷酸缓冲液(pＨ7.2),用玻璃匀浆器在冰浴上匀浆,匀浆液经12000rpm离心15min,取上清液与40%甘油按比例4:1混合作电泳样品,4℃冰箱中暂存备用.1.3 电泳及染色采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板电泳.分离胶浓度为7.5%(pＨ8.9),浓缩胶浓度为3.0%(pＨ6.7),电极缓冲液为pＨ8.3Tris-甘氨酸溶液.
4、染色按照Shaw的染色方法[8].1.4拍照及模式图的绘制染色后的凝胶立即拍照,然后用Photshop软件编辑.按同工酶相对迁移率=迁移距离/溴酚蓝迁移距离,计算同工酶的相对迁移率(Rf值),并绘制成模式图.相同方法重复电泳3次,结果基本一致.2结果——————————基金项目：河南省科技攻关项目（0224070051）河南省动物学省级重点学科经费资助作者简介：王艳梅（1977-），女，硕士学位，研究方向：动物学，Email：ymwang@henannu.edu.cn2.1酯酶(EST)同工酶谱(图1)在两种菊头蝠的8种组织中,EST的酶带数、Rf值、带的强弱均有不同程度的
5、差异.肾脏和肝脏酶谱稍相似,分别有3和4条相同酶带,酶活性相近;心脏、胃有1条相同酶带且酶活相近,其余组织则没有相同酶带.但两种菊头蝠的肾脏、肝脏和小肠均具有较多的酶带.酶带具体分布及相对迁移率(Rf值)见表1.5—Rf1Rf2Rf3Rf4Rf5Rf6Rf7Rf8Rf9+F1F2H1H2L1L2K1K2M1M2S1S2X1X2T1T2图1不同组织EST同工酶谱+F，肺脏；H，心脏；K，肾脏；L，肝脏；M，肌肉；S，胃；T，舌；X，小肠1，马铁菊头蝠；2，角菊头蝠表1各组织酯酶同工酶区带相对迁移率及谱带分布酶带肺心脏肝脏肾脏胸肌胃小肠舌f1f2h1h2l1l2k1k2m1m2
6、s1s2x1x2t1t2Rf10.3280.328Rf20.3680.3680.3680.368Rf30.4040.4040.4040.4040.4040.4040.404Rf40.4220.4220.4220.4220.4220.4220.4220.4220.422Rf50.4780.4780.4780.4780.4780.4780.478Rf60.5070.5070.5070.5070.5070.507Rf70.5140.5140.5140.5140.514Rf80.5810.5810.5810.5810.5810.5810.581Rf90.6040.6040.6042
7、.2乳酸脱氢酶(LDH)同工酶谱(图2)在两种菊头蝠的8种组织中,仅马铁菊头蝠的心脏、肝脏、胸肌、小肠出现了LDH5酶带,其余组织及角菊头蝠的各组织均表现为LDH5酶带缺失.各组织中LDH同工酶向正极的泳动速度不一致,LDH4酶带差异较为显著,且在心脏、胸肌与舌3种组织中分别出现了LDH1和LDH4亚带.LDH同工酶在各组织中活性也不同,心脏、肌肉、小肠中酶活性最强,肺中酶活性最低.LDH同工酶酶带具体分布及相对迁移率(Rf值)见表2.LDH5LDH4LDH3LDH2LDH1—F1F2H1H2L1L2K1K2M1M
