穹窿切断并摘除肾上腺后大鼠下丘脑crh表达变化

《穹窿切断并摘除肾上腺后大鼠下丘脑crh表达变化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、穹窿切断并摘除肾上腺后大鼠下丘脑CRH表达变化：张彦慧,石玉秀,郑小桃,符皎荣,钟南田,洪灯【摘要】　　目的：观察下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropinreleasinghormone,CRH）与糖皮质激素的关系，探讨海马参与HPA轴调节的机制。方法：建立大鼠穹窿切断模型，采用ELISA方法检测穹窿切断0、4、7、10d血中糖皮质激素的浓度;建立大鼠穹窿切断同时摘除肾上腺7d的模型，采用免疫组织化学、免疫印迹方法检测CRH的表达变化。结果：穹窿切断7d后血中糖皮质激素的浓度升高，穹窿切断同时摘

2、除肾上腺7d后，下丘脑CRH表达升高。结论：海马通过穹窿对HPA轴发挥负反馈调节作用，糖皮质激素负反馈调节下丘脑CRH。【关键词】穹窿切断术；穹窿切断并摘除肾上腺；促肾上腺皮质激素释放激素；下丘脑　　［ABSTRACT］Objective:Toobservetherelationbetone（CRH）andglucocorticoidandtoexplorethemechanismofthehippocampusinvolvedinHPAaxisregulation.Methods:Thefornixalmode

3、l，ELISAmunohistochemicalmethodandPUS,BX60,Japan）下观察，摄片。　　1.5免疫印迹法　　取穹窿切断并摘除肾上腺大鼠新鲜下丘脑组织经匀浆、超声粉碎后高速低温离心，11000r/min，取上清；每例标本提取蛋白50μg，7.5％SDSPAGE变性凝胶电泳，浓缩胶80V，30min，分离胶120V，90min；转印，40V，95min和100V，120min；TBS浸泡10min，5%脱脂奶粉封闭60min，TTBS中洗2×5min；CRH一抗(工作浓度1∶1000）中孵

4、育4℃过夜；HRP标记IgG（工作浓度1∶1500）孵育2h，TTBS洗2×5min，TBS洗1×10min，HRPECL法显色,dH2O漂洗，扫描胶片，ScionImage软件分析。　　1.6统计学处理　　所得实验数据以±s表示，用SPSS13.0软件处理，采用方差分析进行两两比较，以P<0.05为有统计学意义。　　正常组及假手术组CRH免疫反应阳性产物呈棕黄色斑块状，主要分布于室旁核神经元的细胞质内。穹窿切断并摘除肾上腺组下丘脑室旁核神经元CRH的阳性表达（0.499±0.077）较正常组（0.387

5、±0.065）、假手术组（0.379±0.082）明显增高，CRH免疫反应的平均光密度值升高，细胞染色变深，（P＜0.05）（图1）。　　2.3免疫印迹法结果　　免疫印迹法检测发现下丘脑CRH的表达在穹窿切断并摘除肾上腺组（91.21±8.73）与假手术组（43.83±4.16）、正常组（39.72±3.48）相比明显升高（P＜0.05）（图2）。　　3讨论　　CRH是一种重要的神经递质,与机体的内分泌、代谢、心血管功能、神经化学和行为反应密切相关。CRH广泛表达于中枢神经系统,但在应激后仅在下丘脑室旁核表达增加

6、［6］。下丘脑室旁核是HPA轴活动的直接控制部位。应激状态下,室旁核分泌CRH经正中隆起、垂体门脉系统作用于垂体前叶细胞上高度表达的CRHR1(CRH的I型受体),刺激垂体前叶合成、分泌ACTH,促进肾上腺皮质分泌糖皮质激素，发挥神经内分泌功能［7］。　　研究表明海马对HPA轴有负反馈调节作用。但是从海马到室旁核没有直接的神经投射,间接路径都汇聚到穹窿,由此可推断海马对HPA轴的调节作用可能是媒介穹窿对下丘脑旁核产生了抑制作用。本课题组的前期实验通过建立大鼠穹窿切断的模型，观察到穹窿切断7d后，CRH的表达升高。

7、提示穹窿切断后,海马对HPA轴的抑制作用减弱,室旁核合成CRH增多,HPA轴活动增强,证明了海马可能通过穹窿对室旁核发挥抑制作用。但是CRH表达升高，HPA轴活动增强的最终结果是糖皮质激素的水平升高。为此，本实验在已有的研究基础上建立了大鼠穹窿切断的模型，检测血中糖皮质激素的浓度，实验结果表明穹窿切断7d后，糖皮质激素的浓度升高，进一步验证了海马通过穹窿对下丘脑室旁核发挥抑制作用。　　现将穹窿切断的动物并摘除肾上腺，即在糖皮质激素水平下降的情况下，观察CRH的表达变化。实验结果表明，穹窿切断并摘除肾上腺7d，CR

8、H的表达升高。有研究表明当糖皮质激素的水平过高时，此激素能通过在下丘脑室旁核及其上游水平的调节而有效抑制CRH的释放［8］。综上结果表明糖皮质激素对CRH有负调节的作用。本实验为探讨海马抑制HPA轴的机制及研究应激的变化机理提供了一定的实验依据。【参考文献】　　1PreilJ,MullerMB,GesingA,etal.Regulationofthehypothalami