院感监测计数实验

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1、实验十三〜十四医院感染的微生物监测及细菌计一、实验目的1.掌握医院感染微生物监测常用培养•基的配制。2.掌握窈压蒸汽火菌器使用及火菌效果的监测方法。3.掌握空气、物表、手、使川屮消毒液及无蔺物品的监测方法。4.掌握紫外线杀菌效果的监测方法。二、实验材料1.试剂缶fl胨、牛肉膏（粉）、鉍化钠、琼脂、蒸馏水、无水磷酸氢二納、磷酸二氢钾、葡萄糖、硫代硫酸钠、卵磷脂、甘氨酸、吐温-8（）、10%NaOH、1NHC1、4%酚红等。2.材料三角烧瓶、fi简、精密pH试纸、天平、高Ik蒸气灭齒器、无菌试管、无菌平皿、加样器、加样尖、电炉、枯草杆菌黑色变种芽胞ATCC93

2、72）等。三、实验方法（一）常用培养基的配制1.普通营养琼脂平板配2000ml成分：蛋白胨10g、十•肉膏（粉）5g、氯化钠5g、琼脂15g、蒸馏水1000ml、pH7.2〜7.4。上述各成份混合、溶解，校正pH。12CC20min火菌后，备用。2.营养肉汤配500ml成分：蛋白胨10g、牛肉膏（粉）5g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml、pH7.2-7.4o上述各成份浞合、溶解，校正pH，分装每管4〜5ml,121°C20min火菌后，备用。3.中和剂配制配500ml成份：无水磷酸鉍二钠2.83g、磷酸二鉍钾1.36g、胰蛋白胨10g、牛肉粉3g、葡萄糖2

3、g、硫代硫酸钠5g、卵磷脂3g、（=）"＜酸3g、吐温-8030ml0将各成分加入到IL蒸馏水中，待完全溶解后，加0.4%酚红4ml,调PH至7.2〜7.4（淡红色），分装每管4ml,121°C20min火菌P，备用。4.无菌盐水：0.9%NaCI分装每管5ml，121°C20min灭菌后，备川。（二）高压蒸汽灭菌器的使用原理在密闭的条件K,蒸汽不能外池，使灭菌锅内压力增尚，随之蒸汽温度也增高。高温蒸汽有很强的穿透性，热传导快，使被灭荫物品（Al温度迅速上升，同吋含水多的环境卜蛋白质较易凝固，通过凝固菌体蛋白而达到灭飽的目的。设备构造高压蒸汽灭菌器是一个双

4、层的金屈圆筒，两层之间盛水。外S竖厚，其上方有金属厚盖，锅沿旁有螺栓，借以将锅盖紧闭，使锅内气体不能外溢，因而蒸汽压力升高，从而水蒸气的温度也相应地升商。尚压蒸汽灭苘器上装奋排气阀计可以显示内部的蒸汽压力和温度、安全活塞以调节蒸汽。K种类有手提式、S立式、横卧式等。它们的构造及火菌原理基本相同。高压蒸汽火菌锅压力与温度的关系见下表。压力—温度（°C）Kg/cm2磅0.3551080.70101161.05151211.4020127现在最常用的培养基火菌条件是1.05kg/cm2（121°C）20min,时间过长有可能破坏培养菽的营养成分。含糖的生化培养难

5、的火菌条件是0.7kg/Cm2（116r）15m‘n,或用流动蒸汽法灭菌。器皿的灭菌可以1.05kg/cm220min。操作方法：1.将欲灭歯物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝。确认已经密闭，方可进入下一步操作。2.关闭排气阀、排水阀，打开进水阀（补足水位）。3.打开电源，加热，使产生蒸汽。4.当压力表指针指达34kPa（5磅/英、r2,108°C）吋，打开排气阀，排出锅内冷气。5.待锅内冷气排尽后，关闭排气阀。观察压力表升至1.05kg/cm2（121°0吋，开始记吋。持续20min，至多不能超过30min，否则营养物受破坏。7.切断电源，让锅内物品然冷却

6、，不可马上打开排气阀，以免发生意外。8.待锅内压力降为零吋，XT可打开锅门，取出物品。注意事项：1.內热式火菌锅，在通电前一定要补足锅内水位，否则加热时会烧毁加热管。2.排气时，必须待锅内冷气完全排!li后才可关闭排气阀加压，否则达不到灭歯效果。3.每周必需定期用留点温度计或嗜热脂肪芽胞杆菌监测灭菌效果。（三）蒸汽高压锅灭菌效果监测生物监测方法：将含有5X1O5〜5Xl（）6cfu嗜热脂肪芽胞杆菌（ATCC7953）的溴甲酚紫蛋白胨水管分3点或5点与待灭尙物品一并放入界器内。经121°C20min灭菌后取出放入56°C〜60'C温箱内培养7天，M吋放一支未

7、灭菌的桁示管作阳性对照，若指示管颜色变黄或混浊即未达到灭菌效果，若培养蕋颜色不变或澄清则灭菌效果合格（四）空气采样及检査方法1.采样时间：选择消毐处理后与进行医疗活动之前期间采样。2.采样高度：与地面垂直高度80〜150cm。3.布点方法：室内面积彡30m2,设一条对角线是取3点，即中心一点。两端各距墙lm处各一点；室内面积〉30m2，设东、南、西、北、中5点，其屮东、南、西、北点均距墙1m。4.采样及培养方法：用9cmH径的普通营养琼脂平板在采样点暴露5分钟P送检培养。35°C24h培养检测。5.结果计算：前苏联细菌学家奥梅杨斯基认为：在ifU积100c

8、m2的培养基表面，5min内沉降的细菌数约和10L空气中含的细菌一