醛固酮及螺内酯对肝星状细胞中timp

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1、醛固酮及螺内酯对肝星状细胞中TIMP：任莉，苌新明，王云，焦明丽，常远鸿【摘要】目的观察醛固酮及螺内酯对活化的肝星状细胞(HSC-T6)作用后不同时间段MMP-2和TIMP-1mRNA的表达情况。方法采用RT-PCR的方法测定HSC-T6中MMP-2、TIMP-1mRNA的表达。结果活化的HSC可表达MMP-2及TIMP-1的mRNA。醛固酮组MMP-2、TIMP-1的mRNA在48、72h表达均高于对照组，在作用24、48、72h时MMP-2、TIMP-1的mRNA的表达随时间递增。而螺内酯组则相反。醛固酮加螺内酯组与单加醛固酮组相比MMP-2、TIMP-1的mRNA表达下降。结论

2、醛固酮可能通过促使MMP-2及TIMP-1mRNA的表达促纤维化，螺内酯可抑制这一作用。【关键词】肝星状细胞；金属蛋白酶(MMPs)；金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)；醛固酮(ALD)；螺内酯　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectofaldosterone(ALD)andspironolactoneontheexpressionofMMP-2andTIMP-1mRNAinhepaticstellatecells(HSC)atvarioustime.MethodsTheexpressionofMMP-2andTIMP-1mRNAeasured

3、byRT-PCRinHSC-T6.ResultsActivatedHSCcouldexpressMMP-2andTIMP-1mRNA.TheexpressionofMMP-2andTIMP-1mRNAincreasedat48hand72hinALDgroup.At24h,48hand72h,MMP-2andTIMP-1mRNAexpressionincreasede.paringthatinspironolactoneplusALDgroupRNAdecreasedat48hand72h.ConclusionALDcanpromotehepaticfibrosisbyincreas

4、ingtheexpressionofMMP-2andTIMP-1mRNA,entionedfunctionofALD.　　KEYMPs);tissueinhibitorsofmetalloproteinases(TIMPs);aldosterone(ALD);spironolactone肝纤维化是慢性肝病发展的共同归宿，细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)的合成和降解不平衡是其形成的主要原因。其中肝星状细胞(hepaticstellatecells,HSC)的活化是纤维化发生的中心环节［1］。活化的HSC可大量生成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、层黏蛋白(laminin,L

5、N)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、透明质酸(hyaluronicacid,HA)等多种ECM成分并合成金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMPs)及金属蛋白酶抑制物(tissueinhibitorsofmetalloproteinases,TIMPs)以及多种细胞因子及炎症介质，促进纤维化发展［2］。MMPs和TIMPs在降解ECM中起着重要作用。近几年发现醛固酮(aldosterone,ALD)可致组织器官纤维化［3］，已证明ALD能在肝脏局部合成，并促进HSC合成胶原；动物实验表明ALD能增加一些促纤维化细胞因子的表达［4-7］，并能调

6、节MMPs和TIMPs的活性［8-9］，这一作用可被其拮抗剂螺内酯拮抗［10］，但具体机制尚不清楚。本实验以HSC为研究对象，从基因水平探讨ALD和螺内酯对MMP-2及TIMP-1mRNA表达的影响。　　1材料与方法　　1.1材料　　大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)由第二军医大学张俊平教授馈赠。螺内酯、ALD、二甲基亚砜、DEPC(美国Sigma公司)；DMEM高糖培养基、胰蛋白酶、琼脂糖(美国Gibco公司)；新生牛血清(杭州赛乐生物工程有限公司)；DNAMarker、2×PCRTaqMix(广州东盛生物科技有限公司)；TrizolReagent(Invitrogen公司)；反转录

7、试剂盒(Fermentas公司)；PCR引物由上海生工生物技术有限公司合成(表1)。表1引物序列及长度（略）　　1.2方法　　1.2.1细胞培养及实验分组　　HSC-T6传代后培养24h，选约20%、40%、60%融合的细胞，用无血清培养基培养4h后换为10mL/L小牛血清的DMEM培养基并分组：对照组不含干预因素；醛固酮组含1×10-5mmol/L醛固酮；螺内酯组含1×10-6mmol/L螺内酯；醛固酮加螺内酯组含1×10-5mmol/L和1×10-6m