免疫荧光组织化学技术

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1、免疫荧光组织化学技术一、免疫荧光组织化学技术的发展史概述……………………………………………………二、免疫荧光组织化学的原理…………………………………………………………………（一）直接方法……………………………………………………………………………1．检查抗原方法……………………………………………………………………2．检查抗体方法……………………………………………………………………（二）间接方法……………………………………………………………………………1．检查抗体(夹心法)方法……………………………………………………………2．检查抗体方法……

2、………………………………………………………………3．检查抗原法………………………………………………………………………（三）补体法………………………………………………………………………………1．直接检查组织内免疫复合物方法………………………………………………2．间接检查组织内抗原方法………………………………………………………（四）双重免疫荧光组织化学标记方法…………………………………………………（五）对照试验……………………………………………………………………………1．直接方法…………………………………………………………………………2．间接

3、方法…………………………………………………………………………3．补体方法…………………………………………………………………………三、荧光抗体的制备………………………………………………………………………………（一）荧光素………………………………………………………………………………1．异硫氰酸荧光素…………………………………………………………………2．四甲基异硫氰酸罗达明…………………………………………………………3．得克萨斯红(Texasred)……………………………………………………………4．其它荧光素………………………………………………

4、…………………………（二）荧光素标记抗体的方法……………………………………………………………1．FITC标记抗体的方法……………………………………………………………2．四甲基异硫氰酸罗达明标记抗体方法……………………………………………3．藻红蛋白标记抗体方法……………………………………………………………4．蓝色荧光素标记抗体方法…………………………………………………………（三）荧光抗体的质量控制………………………………………………………………1．染色特异性和敏感性的测定方法…………………………………………………2．F/P比值的测定方法……

5、…………………………………………………………3．荧光抗体的保存……………………………………………………………………41四、免疫荧光组织化学染色方法………………………………………………………………（一）荧光抗体染色方法…………………………………………………………………1．直接方法……………………………………………………………………………2．间接方法(双层法)………………………………………………………………3．间接方法(夹心法)………………………………………………………………4．补体方法…………………………………………………………………………

6、…5．膜抗原荧光抗体染色方法………………………………………………………6．双重染色方法………………………………………………………………………7．荧光抗体再染色方法………………………………………………………………（二）荧光抗原染色方法…………………………………………………………………五、荧光显微镜检查方法………………………………………………………………………（一）荧光和荧光显微镜…………………………………………………………………（二）荧光显微镜标本制作要求…………………………………………………………1．载玻片…………………………………………

7、…………………………………2．盖玻片……………………………………………………………………………3．标本…………………………………………………………………………………4．封裱剂………………………………………………………………………………5．镜油…………………………………………………………………………………（三）使用荧光显微镜注意事项…………………………………………………………（四）荧光图像的记录方法………………………………………………………………六、非特异性染色的消除方法…………………………………………………………………（一）非特异性染色的

8、主要因素…………………………………………………………（二）消除非特异性染色的方法…………………………………………………………1．葡聚糖凝胶G-50柱层析法…………………………………………………