柯萨奇b3 病毒抗原决定簇的多态性和致病性

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1、柯萨奇B3病毒抗原决定簇的多态性和致病性关键词:柯萨奇病毒B组;抗体，单克隆;表位摘要:目的分析由各脏器分离出的柯萨奇B3病毒（CVB3）抗原决定簇的异同，并探讨其与致病性的关系.方法利用自制的26种柯萨奇B3病毒mAb（CVB3-McAb）与心脏、肝脏、肾脏及肺脏分离出的CVB3株进行免疫荧光分析，观察各分离株抗原决定簇的变化，并将各分离株再次注入动物体内，观察心、肝、肾及肺的病理改变.结果CVB3在不同器官的细胞中繁殖后，其抗原决定簇发生改变，CVB3-McAb2A4，2B2，2D3，2D4与肝、肺、心、肾分离株均发生反应;26种CVB3-McAb

2、中有4种不与心脏分离株反应;有15种不与肝脏分离株反应;有21种不与肺脏分离株反应;有11种不与肾脏分离株反应.且各分离株对器官的致病程度亦有差异.结论CVB3各分离株抗原决定簇有差异;病毒抗原决定簇的不同是影响其致病性的重要因素之一.　　Keyonoclonal;epitopes　　Abstract:AIMToanalyzeantigenicdeterminantofCox-sackievirusB3（CVB3）separatedfromdifferentorgansandtoexploreitsrelationship-munofluorencea

3、nalysisofCVB3strainsseparatedfromheart，liver，kidneyandlungakingCoxsackieB3monoclonalantibody（CVB3-McAb）ed，andthealterationofantigenicdeterminantsoftheisolatesal　bodyagainandobservedthepathologicalterationofheart，liver，kidneyandlung.RESULTSAfterthevirusrepro-ducedindifferentorgan

4、s，CoxsackieB3viralantigenicdeter-minantchanged，andCVB3-McAb2A4，2B2，2D3，2D4allre-actedinant，andthedifferenceofviralantigenicdeterminantisoneoftheimpor-tantfactorsthataffectthepathogenicity.　　0引言　　柯萨奇B病毒（CVB）感染不仅引起病毒性心肌炎，也可引起心包炎、无菌性脑炎、肺炎等疾病.Hu-ber等［1］观察到CVB分离株引起各器官感染的程度不同，认为与各器官中血

5、管内皮细胞上病毒受体表达不同有关.但未观察各器官分离出的病毒是否有差异.目前，CVB相同血清型变异株与致病性的关系，已成为近年来研究热点之一，许多学者从这一角度做了大量工作.与其他小RNA病毒一样，CVB3病毒基因5’端非编码区和外壳蛋白VP1中某些位点变异能影响其致心肌炎毒力［2-5］.为此，我们应用自制的CVB3mAb（CVB3-McAb），分析、比较了由心脏、肝脏、肾脏及肺脏分离出的CVB3病毒株，以了解各分离株病毒抗原决定簇的差异，并探讨其与致病性的关系.　　1材料和方法　　1.1材料SPFBALB/c小鼠，6L・L-1的悬液.经

6、2000r・min-1离心20min，用上清液接种I1640进行培养.观察细胞病变达+～后去掉培养液，用PBS充分洗去血清，收集cAb各10μL分别滴加抗原片上，湿盒内37℃孵育1.5h，应用0.01mol・L-1PBS及三蒸水震洗、吹干.滴加羊抗小鼠免疫荧光IgG二抗，湿盒内37℃孵育1.5h，继续应用PBS及三蒸水震洗、吹干.玻片上滴加缓冲甘油，荧光显微镜下观察.　　1.2.4CVB分离株的动物接种及标本处理方法将各分离株病毒103TCID50接种于BALB/c小鼠腹腔，每组2只.4d后将其处死，取心、肝、肾、肺标本.标

7、本经40g・L-1的多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，HE染色，OLYMPUS-PM-10-A显微镜观察病理改变.　　2结果　　2.1CVB3分离株检测应用融合出的26种CVB3-McAb与各器官分离出的CVB3分离株进行了3次重复检测，其结果一致（Tab1）.　　表1各器官CVB3分离株与26种单克隆抗体之间的反应　略　　由表1可以看出，所有CVB3-McAb均与原始株反应;CVB3-McAb2A4，2B2，2D3，2D4与肝、肺、心、肾分离株均发生反应;26种CVB3-McAb中有4种不与心脏分离株反应;有15种不与肝脏分离株反应;有

8、21种不与肺脏分离株反应;有11种不与肾脏分离株反应.26种CVB3-McAb与心、肝、肺、肾