人era和人era c端蛋白在大肠杆菌中的高表达

人era和人era c端蛋白在大肠杆菌中的高表达

ID:20314270

大小:55.50 KB

页数:4页

时间:2018-10-09

人era和人era c端蛋白在大肠杆菌中的高表达_第1页
人era和人era c端蛋白在大肠杆菌中的高表达_第2页
人era和人era c端蛋白在大肠杆菌中的高表达_第3页
人era和人era c端蛋白在大肠杆菌中的高表达_第4页
资源描述:

《人era和人era c端蛋白在大肠杆菌中的高表达》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库

1、人Era和人EraC端蛋白在大肠杆菌中的高表达  摘要:目的在大肠杆菌中的高表达人Era和人EraC端蛋白.方法PCR扩增人era基因(h-era)的全长cDNA和h-eracDNA的C端区域基因.h-eracDNA克隆到(His)6融合表达载体pRSET-C中,构建融合表达质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达(His)6-h-Era融合蛋白;h-eracDNA的C端区域基因克隆到非融合表达载体pDH中PL启动子下游,转化大肠杆菌TAP106,42℃热诱导表达人EraC端蛋白(h-Era-C).SDS-PAGE电泳、凝胶薄层扫描检测蛋白的表达.结果

2、表达的(His)6-h-Era融合蛋白产物占全菌总蛋白的80%;人EraC端蛋白占全菌总蛋白的40%.结论人Era蛋白和EraC端蛋白在大肠杆菌中获得了高表达.  KeyanEra;humanEraC-terminaldomain;Es-cherichia.coli;geneexpression  Abstract:AIMTohighlyexpresshumanEra(h-Era)andh-EraC-terminaldomainproteininE.coli.METHODSHu-manera(h-era)cDNAandh-eracDNAC-terminaldomain

3、geneplifiedbyPCRbyusingaplasmidcontainingh-eracDNAasatemplate,andligatededidpRSET-C-h-eraedidpDH-h-era-Cinaldomainprotein.Theexpressionproductsatography-scanning.RESULTStheexpressed(His)6-h-Erafusionproteininaldomainproteininaldomainproteinhadbeensuc-cessfullyhighlyexpressedinE.coli.  0

4、引言  era基因首先在大肠杆菌中被发现,最早由于其编码的氨基酸序列与人及酵母的RAS蛋白有部分相似之处,命名为E.coliRas-like(era)基因[1].但其后仔细分析,纠正了最初发表序列中的部分错误,并注意到仅EraN端的序列与Ras相似,Era并不属于Ras家族[2].大肠杆菌era基因的同源基因广泛存在于原核生物中,在蠕虫、小鼠、和人以及金鱼草(An-tirrhinum)等真核生物中,也存在与细菌era高度同源的基因[3-5].era基因编码的Era蛋白能特异地与鸟苷酸结合,具有GTP酶活性[2,6].Era蛋白N端为GTP结合区,与真核Ras蛋白中GT

5、P结合区的氨基酸序列有显著的同源性;C端与真核Ras蛋白及其它G蛋白均无同源性,为Era所特有的保守区,其中含有VIGxxGxxIK序列,该序列是与RNA结合的KH结构域的保守序列[7].实验证明Era蛋白可与大肠杆菌16SrRNA结合,C端的缺失的Era蛋白不能与16SrRNA结合,失去其生物功能[8].因此Era是一类有别于RAS的新的G蛋白.era基因与细菌细胞周期和细胞分裂有关,是细菌生存繁殖所必需的重要基因,它对细菌细胞周期的作用点在染色体分裂之后、细胞质分裂之前[3].在真核细胞中,era基因也具有重要的作用.金鱼草中era的同源基因erg的缺失突变可使植

6、物胚胎的发育受阻[5]人era基因的全长cDNA于1998年被克隆,与原核era基因具有很高的同源性.人Era蛋白与大肠杆菌Era蛋白的氨基酸序列有30%相同,两者的相似性为53%[4].人era基因的功能尚不清楚.我们采用基因工程手段,在大肠杆菌中高表达了人Era和EraC端蛋白,为制备抗人Era抗体,研究人Era和EraC端蛋白的理化特性,阐明人era基因功能打下了基础.  1材料和方法  1.1材料  克隆有h-era全长cDNA的质粒pBS-h-era由陈苏民教授提供;(His)6融合表达载体pRSET-C购自Invitrogen公司;表达载体pDH由本实验室

7、在pBV220的基础上构建.E.coliTAP106和E.coliBL21(DE3)由本实验室保存提供.Taq酶、Klenoa公司.蛋白电泳系统为Bio-Rad公司产品.DNA测序仪为PE公司ABI377型.薄层扫描仪CS-9000为岛津公司产品.1.2方法  1.2.1PCR扩增h-era  全长cDNA和其C端区域基因以pBS-h-era质粒为模板,用引物1和引物3扩增h-era全长cDNA,用引物2和引物3扩增h-eracDNAC端区域基因.PCR反应条件均为:94℃45s,58℃45s,72℃60s,共30个循环.PCR引物序列:引物1:5′

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。