区带毛细管电泳法测定珍菊降压片有效成分的含量

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1、区带毛细管电泳法测定珍菊降压片有效成分的含量【摘要】目的建立区带毛细管电泳法分离测定珍菊降压片中芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪的含量。方法采用未涂层石英毛细管柱(75μm×53cm,有效柱长45cm)，以20mmol/L硼砂-5mmol/L磷酸二氢钠(pH9.0)为运行缓冲液，检测波长210nm，温度20℃。结果芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪分别在2.25～40.50，0.45～8.10，0.27～4.86，2.70～48.60，2.70～48.60μg/ml浓度范围内线性关系良好，回收率和重复性良好。结论该法快速准确，适合于珍菊降压片的质量控制。【

2、关键词】区带毛细管电泳珍菊降压片芸香苷绿原酸木犀草素盐酸可乐定氢氯噻嗪珍菊降压片是中西药结合治疗高血压病的常用药物，由野菊花膏粉、珍珠层粉及芦丁3味中药和盐酸可乐定与氢氯噻嗪两味西药组成。方中野菊花可清热降火,平肝降压；珍珠层粉可平肝潜阳,安神定惊,清热明目,共为主药。两味西药具有中枢降压和利尿降压作用,共为辅药。芦丁可降低毛细血管通透性,增加其张力，为佐使药。诸药合用，克服了西药副作用大、中药起效慢的弱点，近年来日益受到高血压病患者的青睐。目前有关珍菊降压片中有效成分的测定已有文献报道〔1～5〕，但其中5种有效成分的同时测定尚未见文献报道。本实验建立区带毛细管电泳法同时分离测定珍

3、菊降压片中芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪的含量。1仪器与材料1HPCE-01高效毛细管电泳仪（山东省化工研究院）；N2000色谱数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；岛津UV-2450分光光度计。对照品（中国药品生物制品检定所，含量>99％），水为二次重蒸水，其它试剂均为分析纯。珍菊降压片（山西亚宝药业集团股份有限公司，批号060125，060416，070128）。2方法和结果2.1对照品溶液配制分别精密称取干燥至恒重的芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪对照品适量，以50%甲醇为溶剂制备各25ml溶液，浓度分别为0.25，0.05，0.03，

4、0.30mg/ml和0.30mg/ml。4℃冰箱储存，使用前稀释为不同浓度的工作溶液。2.2供试品溶液制备取供试品20片，精密称定,研细,取约2片量，精密称定。加50%甲醇20ml/次，超声提取3次，20min/次，放冷滤过，滤液置100ml量瓶中,用少量50%甲醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。进样前按要求稀释并用0.45μm滤膜滤过。2.3电泳操作条件未涂层石英毛细管柱(75μm×53cm，有效长度45cm)，运行缓冲液为20mmol/L硼砂-5mmol/L磷酸二氢钠(pH9.0)，重力进样10s(高度10cm)，分离电压20kV,检测波长21

5、0nm，温度20℃。毛细管使用前用0.10mol/LNaOH、水、0.10mol/LHCl各清洗10min进行活化，每次运行间用水、缓冲溶液各冲洗5min。为了保证重复性，缓冲溶液每运行3次后进行更换。在此条件下，珍菊降压片的电泳谱图如图1～2。1.盐酸可乐定2.绿原酸1.盐酸可乐定2.绿原酸3.氢氯噻嗪4.木犀草素3.氢氯噻嗪4.木犀草素5.芸香苷5.芸香苷图1标准溶液的毛细管电泳图谱图2样品溶液的毛细管电泳图谱2.4线性关系考察分别精密吸取芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪对照品溶液各4.5ml于25ml容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，得标准混合液。再分别精

6、密吸取该标准混合液0.5，2.0，3.5，5.0，7.0，9.0ml各置于10ml量瓶中,用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，进样测定。以峰面积A对浓度C(μg/ml)进行线性回归。结果见表1。表15种分析物的线性关系2.5精密度测定精密吸取“2.4”项下标准混合液3.0ml于10ml容量瓶中，定容，摇匀，重复进样6次，测得芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪峰面积的RSD分别是2.45%，3.16%，3.86%，2.08%，1.97%。结果表明精密度良好。2.6重复性测定精密称量同一批号的珍菊降压片，按“2.8”项下测定6次，测得样品中芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢

7、氯噻嗪含量的RSD分别是1.46%，3.52%，3.65%，2.36%，1.83%。结果表明重复性良好。2.7加样回收率的测定精密称取已测知含量的珍菊降压片适量3份，分别精密加入“2.4”项下标准混合液2.0，4.0，6.0ml，按“2.8”项下操作。测得芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪平均回收率分别为99.3%，99.6%，100.9%，101.2%，103.2%；RSD分别为3.57%，2.52%，3.18%，2.60%，2.53%（n=5）。2.8