人类不同年龄段腰椎间盘组织细胞凋亡及其调控蛋白bcl2和bax的表达

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1、人类不同年龄段腰椎间盘组织细胞凋亡及其调控蛋白Bcl2和Bax的表达【摘要】目的探讨细胞凋亡及其调控蛋白在人类不同年龄段椎间盘组织退变中的作用及其可能存在的基因调控机制。方法对0～58岁不同年龄段正常人腰椎间盘髓核细胞的形态结构进行苏木精伊红染色光镜观察、TUNEL细胞凋亡检测、Bcl2和Bax蛋白免疫组织化学染色。结果从胚胎后期开始，椎间盘髓核细胞数量随年龄增长而逐渐减少，到老年阶段髓核细胞的数量已经很少(H=95.123，P<0.05)。从胚胎后期到成年，TUNEL阳性细胞率随年龄增长而逐渐降低，并降到整个生命过程中的最低点；继之，TUNEL阳性细胞率又逐年升高(

2、F=205.391，P<0.05)。自胚胎后期开始，Bcl2蛋白就开始有较高水平的表达，但呈现逐年下降的趋势(F=81.385，P<0.05)。Bax蛋白在胚胎后期即呈现较高水平表达，随年龄增长其表达水平逐渐降低(F=102.134，P<0.05)；到成年后，Bax蛋白表达水平又有所升高，但不明显。结论在整个生命过程中，随年龄增长大量腰椎间盘髓核细胞发生凋亡，细胞数量明显减少。Bcl2蛋白可能参与了椎间盘细胞凋亡的调节，但表达水平较低，不能阻止细胞凋亡的发生。Bax蛋白的表达可能参与了整个生命过程中椎间盘髓核细胞的凋亡。【关键词】椎间盘髓核细胞细胞凋亡蛋白

3、质Bcl2蛋白质Bax［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigateapoptosisofintervertebraldisccellsandgeneregulationindifferentagesofhumanbody.MethodsTheintervertebraldisccellsindifferentagesofhumanbodyinedbyhematoxylinandeosinstaining,TdTmediateddUTPnicklabeling(TUNEL)andBcl2,Baxproteinimmunohistochemicalmet

4、hod.ResultsFromthelaterstageofembryo,thenumberofnucleuspulposuscellsreducedgraduallyefethelaterstageofembryotoadulthood,therateofTUNELpositivecellsreducedgraduallytothelobryo,butreducedgraduallythelaterstageofembryotoadults,therateofBaxproteinpositivecellsreducedgraduallyadultstooldage.Conc

5、lusionItisthroughapoptosisthatnucleuspulposuscellsofintervertebraldiscdie,thenumberofcellsdecreaseobviously.ApoptosisofnucleuspulposuscellsmightbeBaxdependent,andbecauseofthelo，分别行HE、TUNEL和Bcl2、Bax蛋白免疫组织化学染色。1.3观察方法使用OLYMPASBX50多功能显微镜观察组织，然后把镜下的图像用摄像机接转至彩色监视器屏幕上，计数细胞数。当细胞剖面压在边线时，只计算压上边线和左

6、边线者，压下边线和右边线者不计入。每组选取4张切片，每张切片在高倍镜下随机选取5个视野，计数单位面积内髓核细胞的数量，结果用±s表示，将所得数据进行单因素方差分析。运用显微图像分析系统（VIDAS）测定椎间盘髓核细胞内免疫反应产物的平均吸光度值。在每张切片上随机选出5个视野进行计算机显微图像分析，测得其平均吸光度值，结果用±s表示，并对所得数据进行单因素方差分析。2结果2.1HE染色观察在婴幼儿及儿童时期，髓核细胞数量较多，以长椭圆形或梭形脊索细胞为主，可见少量纤维样细胞。随着年龄的增长，脊索细胞逐渐减少，并开始出现软骨样细胞。至成年后，脊索细胞几乎完全消失，在髓核中以软骨样细

7、胞为主，脊索样细胞偶见。此后，伴随着年龄的增长，软骨样细胞的数量呈进行性减少，50岁以后髓核内细胞数量已经很少(H=95.123，q=7.651～10.243,P<0.05)。见表1。2.3Bcl2免疫组织化学染色从胚胎时期开始，随着年龄的增长Bcl2蛋白免疫阳性细胞的百分率基本上呈持续降低的趋势；阳性颗粒的平均吸光度值随年龄的增长呈现同样的变化趋势(F=81.385、320.176，q=1.471～22.805，P<0.05)。见表2。2.4Bax免疫组织化学染色在婴幼儿及