缺氧时缺氧诱导因子1α在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系

《缺氧时缺氧诱导因子1α在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、缺氧时缺氧诱导因子1α在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系【关键词】缺氧诱导因子1α胃癌细胞SGC7901细胞凋亡；增殖　ExpressionofHIF1αandItsRelationshiptoApoptosisandProliferationinGastricCancerCellDuringHypoxiaKeyl的细胞悬液。并分为对照组、缺氧4h组、缺氧8h组、缺氧16h组。各取细胞悬液2ml/孔分别接种于装有盖玻片的6孔培养板内。对照组入CO2培养箱（20%氧、5%CO2、75%氮、37℃）中培养72h，缺氧4h组

2、、缺氧8h组、缺氧16h组。分别入CO2培养箱培养68、64、56h后，再入微缺氧装置内继续培养4、8、16h。1.2.3SP免疫组化法检测HIF1α、Fas、PA取出6孔板内已爬满细胞的盖玻片，PBS洗涤，4%多聚甲醛固定,0.3%H2O2/甲醇作用30min,正常羊血清阻断30min,分别给缺氧组和对照组依次加入稀释的一抗HIF1α、Fas、PA，4℃孵育过夜,生物素化二抗和辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素依次处理(37℃,孵育30min),期间均用PBS洗涤,AEC显色,水溶性封片剂封片。每次染色时均以PBS代替一抗作为阴性

3、对照。1.2.4判断标准排除爬片边沿细胞，10×10低倍镜下随机选取10个细胞分布均匀的视野，10×20中倍镜下随机计数50个细胞／每视野。按着色强弱分4个等级，按公式HSCORE＝∑Ｐi(i+1)(i=0、1、2、3;Pi表示评分为i的比例)计算HSCORE得分。1.3统计学处理所有数据均用±s表示，采用F检验及q检验分析，数据均用统计软件包SAS8.0分析。用Spearman等级相关分析HIF1α同SGC7901细胞PA、Fas的相互关系。2结果2.1不同氧状态下人胃癌细胞株SGC7901HIF1α、Fas、PA的表达常

4、规培养条件下SGC7901细胞仅个别细胞有HIF1α阳性表达，低氧处理4h后HIF1α出现阳性表达，并随低氧处理时间的延长逐渐增加（rs=0.935），见图1。常规培养条件下Fas、PA均在SGC7901细胞有阳性表达，低氧处理4h后Fas表达增加，但随低氧处理时间的延长，Fas表达所有下降（rs=-0.972），见图2、3。PA在不同氧状态下的表达无明显差异，见表1。表1不同氧状态下HIF1α、Fas和PA在SGC7901细胞的表达常规培养条件下由于HIF1α在SGC7901细胞低表达，无法判断其同Fas及PA的关

5、系。缺氧条件下SGC7901细胞HIF1α表达同Fas表达呈负相关（rs=-0.961,P<0.05），同PA表达无关（rs=-0.632,P>0.05）。3讨论3.1HIF1α在不同氧状态下人胃癌细胞株SGC7901的表达Zhong等[7]对包括胃癌、胰腺癌等癌组织标本及人体正常组织分析发现，大多数人体正常组织中没有或仅有弱阳性的HIF1表达，而癌组织中HIF1呈过度表达。体外实验也证实HIF1α在多种肿瘤细胞株缺氧时呈阳性表达[8，9]，本研究发现SGC7901细胞在常氧下仅个别细胞HIF1α呈阳性

6、表达，阳性表达部位在胞核,阳性率仅在1%～3%。可以认为在常氧下SGC7901细胞不表达HIF1α，在低氧处理后，HIF1α表达明显上调。可能同缺氧阻止了HIF1α的降解，使在非缺氧时易降解的HIF1α蛋白稳定性增加。HIF1α蛋白水平呈指数增加有关[10，11]。本研究还发现HIF1α表达随缺氧时间的延长逐渐增加，是否同SGC7901细胞逐渐适应缺氧有关，尚待进一步研究。3.2缺氧状态下SGC7901细胞HIF1α的表达同细胞凋亡的关系缺氧能诱导肿瘤细胞凋亡，己在实验研究中得到证实[9]。但缺氧时HIF1α的

7、表达同细胞凋亡的关系尚存有争议。Akakura等［10］在胰腺癌的研究中发现HIF1α高表达的胰腺癌细胞比无HIF1α表达的更能抵抗缺氧和无糖所诱导的凋亡。HIF1α高表达可以明显地增加bcl2的表达[11]，而在樊利芳等[12]研究中显示，HIF1α表达同bcl2的表达呈负相关，表明HIF1α促进缺氧环境下肿瘤细胞凋亡。本实验中我们发现，在缺氧环境下SGC7901细胞HIF1α表达明显上调，同参与细胞凋亡诱导的Fas基因的表达呈负相关，从而使SGC7901细胞能抵抗缺氧所诱导的凋亡。可能同受HIF1所调控，参

8、与能量代谢和运输基因及蛋白以不同方式参与肿瘤细胞对缺氧的适应过程有关。3.3缺氧状态下SGC7901细胞HIF1α的表达同细胞增殖的关系PA是DNA聚合酶的辅助因子，参与DNA的合成。已广泛使用于评定肿瘤细胞增殖活性。HIF1α