医学毕业论文缺氧时缺氧诱导因子1α在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系

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1、缺氧时缺氧诱导因子1a在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系姓名：2014年6月25日缺氧时缺氧诱导因子la在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系【摘要】目的研究缺氧诱导因子la(hypoxiainduciblefactorla，HIFla)在缺氧的胃癌细胞SGC7901的表达及其同缺氧时Fas、PCNA关系，探讨HIFlot同缺氧时胃癌细胞增殖凋亡的关系。方法产气袋法(GasPaK)制造缺氧细胞培养条件，细胞免疫化学观察SGC7901细胞HIFla、PCNA及Fas的变化。结果缺氧时SGC7901细胞HIFla表达明显上调，HIFla

2、表达随缺氧时间延长而增加。缺氧时HIFla表达与Fas呈负相关(TO.05)，同PCNA表达无关。结论缺氧能使SGC7901细胞HIFla表达明显上调，HIFla抑制缺氧诱导的细胞凋亡，同缺氧时胃癌细胞增殖无关。【关键词】缺氧诱导因子la胃癌细胞SGC7901细胞凋亡；增殖ExpressionofHIFlaandItsRelationshiptoApoptosisandProliferationinGastricCancerCellDuringHypoxiaKeywords:Hypoxiainduciblefactorla;Gastricc

3、ancercellSGC7901;Apoptosis;Proliferation资料显示，实质性肿瘤发生过程屮，由于血管生长的相对滞后和肿瘤细胞的快速增殖导致肿瘤细胞缺氧［13］。缺氧是实质性肿瘤微环境的基本特征之一。缺氧诱导因子(hypoxiainduciblefactor,HIF1)是在缺氧条件下广泛存在于人和哺乳动物体内的一种转录因子。由HIFla和HIFip亚单位组成，HIFla是HIF1特有的受缺氧调控的亚基，决定HIF1的活性。HIFlot是迄今为止发现的唯一一个特异性缺氧状态下发挥活性的转录因子。近年来，随着对HIFla研究的

4、进一步深入，发现它广泛存在于动物和人类的多种肿瘤细胞中，其活性对维持肿瘤细胞能量代谢、新生血管形成、促进肿瘤侵袭和转移起重耍作用。探讨HIFla同缺氧条件下肿瘤细胞凋亡、增殖的关系，了解其在肿瘤细胞凋亡、增殖的作用。对于研宂HIFla在肿瘤发生、发展中的作用及探索以HIFlot为靶点的抗肿瘤治疗奋重要意义。本研宄通过对人胃癌细胞SGC7901中HIFla的表达及其同缺氧时Fas、PCNA表达的检测，探讨HIFla在冑癌发生、发展中可能的作用。1材料及方法1.1材料人胃癌细胞株SGC7901，重庆医科大学病理生理教研室提供。兔抗人Fas多克隆

5、抗体（工作浓度1:200），SP免疫组化试剂盒，购于北京屮山生物技术有限公司。鼠抗人PCNA多抗（工作浓度1:400）购于武汉博士德生物工程公司。鼠抗HIFla单抗（工作浓度1:25）,购于晶美生物工程公司。1.2方法1.2.1微缺氧条件的制造运用产气袋法（GasPaK）制造微缺氧条件。通过血气分析仪监测含小牛血清的RPMI1640培养液中P02、PCO2和pH的变化，本装置在48h内PO2、PCO2和pH稳定，并能达到微缺氧细胞培养的条件（1%〜5%氧、5%CO2及90°/。氮）。1.2.2不同氧状态下细胞爬片的制备取对数生长期的SGC7

6、901细胞，用含10%小牛血清RPMI1640培养液，配成浓度为5x104/ml的细胞悬液。并分为对照组、缺氧4h组、缺氧8h组、缺諷16h组。各取细胞悬液2ml/孔分别接种于装有盖玻片的6孔培养板内。对照组入C02培养箱（20%氧、5%CO2、75%氮、37°C）中培养72h,缺氧4h组、缺氧8h组、缺氧16h组。分别入C02培养箱培养68、64、56h后，再入微缺氧装置内继续培养4、8、16ho1.2.3SP免疫组化法检测HIFlot、Fas、PCNA取出6孔板内己爬满细胞的盖玻片，PBS洗涤，4%多聚甲醛固定，0.3%H2O2/甲醇作

7、用30min,正常羊血清阻断30min,分别给缺氧组和对照组依次加入稀释的一抗HIFla、Fas、PCNA,4°C孵育过夜，生物素化二抗和辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素依次处理（37°C，孵育30min）,期间均用PBS洗潘，AEC显色，水溶性封片剂封片。每次染色时均以PBS代替一抗作为阴性对照。1.2.4判断标准排除爬片边沿细胞，10x10低倍镜下随机选取10个细胞分布均匀的视野，10x20中倍镜下随机计数50个细胞/每视野。按着色强弱分4个等级，按公式HSCORE=[Pi（i+l）（i=0、1、2、3;Pi表示评分为i的比例）计算HSC

8、ORE得分。1.3统计学处理所有数据均用±s表示，采用F检验及q检验分析，数据均用统计软件包SAS8.0分析。用Spearman等级相关分析HIFlot同SGC7901细胞PCN