鸡蛋清溶菌酶的提取及电泳鉴定2012ppt课件

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1、鸡蛋清溶菌酶的提取及电泳鉴定药学院2010-12-19实验目的：1了解鸡蛋清溶菌酶的性质、常用制备方法及原理2掌握盐析法分离蛋白质原理及操作3掌握SDS-PAGE鉴定蛋白纯度的原理及操作1溶菌酶的性质溶菌酶(Lysozyme,EC3.2.1.17)由英国细菌学家弗莱明(Fleming)在1922年在人的眼泪、唾液中发现的。广泛存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪液、唾液、血浆、尿、乳汁、其它体液中及白细胞和组织（如肝、肾）细胞内，而且部分植物、微生物中也含有此酶。人溶菌酶的活性是最高的，大约为鸡蛋

2、清溶菌酶酶活力的3倍。但是蛋清中溶菌酶含量最丰富，约为0.3%-0.4%左右，而且蛋清来源广泛，因此多数商品溶菌酶是从蛋清中提取的。鸡蛋清溶菌酶是动植物中溶菌酶的典型代表，也是目前了解最清楚的溶菌酶之一。白色、无臭结晶粉末，味甜，易溶于水，遇碱易破坏，不溶于丙酮、乙醚中。其分子是由129个氨基酸残基排列构成的单一肽链，有四对二硫键，分子量为14300。碱性球蛋白，碱性氨基酸残基及芳香族氨基酸如色氨酸残基的比例很高。其等电点为pH10.7；其最适pH值为pH7左右，最适温度为50℃。不规则的椭圆体，比

3、较容易结晶，结晶形状随结晶条件而异，有菱形八面体、正方形六面体及棒状结晶等。用X射线衍射测得此酶的体积为45×30×30Ǻ。2.1食品工业上的应用选择性的分解微生物的细胞壁，而不能作用于其它物质，主要应用于海产品、水产品、乳制品和干酪的保鲜，低度酒、糕点及饮料的防腐，以及水产熟制品及肉类熟制品的防腐保鲜。加入到饮料中，如钙奶、乳酸饮料中,也可起到防蛀牙、爽口的作用。为弥补奶粉的不足，可以向其中添加适量溶菌酶，制成母乳化奶粉，可以加强婴幼儿的抗感染能力，可以促进婴儿胃内乳酪蛋白形成细微凝乳，有利于婴儿

4、的消化吸收。特别对早产婴儿，有防止体重减轻、预防消化器官疾病、增进体重等功效。2.2酶工程上的应用近年来，溶菌酶已成为基因工程及细胞工程必不可少的工具酶，用以提取菌体内的活性物质如核酸、酶及活性多肽等。2.3发酵工业上的应用溶菌酶制备酵母膏，则不仅可以提高浸膏量的收率，还可以大大缩短酵母膏的制备时间。溶菌酶还可用于菌体内含物质的提取。2.4医学上的应用溶菌酶制备的口腔药片或漱口液治疗副鼻窦炎、口腔溃疡、扁平苔藓和渗出性中耳炎等疾病。作口服剂可抑制流行性感冒和腺病毒的生长、抗感染及抗炎症，还具有多种药

5、理作用。还具有一定的保健作用；有促进血液凝固和止血作用；有组织再生和瘢痕形成促进作用等。2.5科学研究中的应用利用溶菌酶专一性地水解细胞壁的特点,了解微生物细胞壁的构造，分解细胞壁后制备原生质体，从而用于微生物育种以及微生物分类等学术研究的领域。3溶菌酶的生产现状及前景上世纪50年代，国外开始了溶菌酶的工业化生产。采用从鸡蛋清中直接结晶得溶菌酶，产品用来制作口服药剂。上世纪60年代，又开发了离子交换法，进一步降低了生产成本，提高了产品质量，达到了注射级药品质量要求。上世纪70年代，开发了亲和色谱技术

6、，主要用于高纯度生化试剂的生产。近来超滤法与其它方法相结合，进一步提高了溶菌酶的生产工艺水平。目前美国、加拿大、荷兰、法国、德国、丹麦、意大利、日本等国家均生产溶菌酶，其产量与日俱增。近年来，溶菌酶被用作天然防腐剂，极大的促进了其市场需求，每年以10%的速率增长，现在市场规模约为700吨。我国的食品工业、精细化工业、医药工业对溶菌酶具有较大的需求。我国于上世纪70年代采用离子交换法生产溶菌酶。目前国内有大连生化、天津东原、烟台金梓等厂家生产，初步满足了国内科研及医药工业的需求。进口溶菌酶，存在着价格

7、较高，进口环节复杂等诸多方面的限制。国产溶菌酶工业刚刚起步，生产规模小，工业水平落后，产品的质量与国际标准差距较大。存在提取率低，处理量小和产品比活低等缺点。我国是世界上最大的产蛋国家，原料来源丰富，目前鲜蛋基本作为初级食品食用，深加工不足。而发达国家的鲜蛋加工业可以加工鲜蛋总产量的40%。1kg鸡蛋大约8元，提取出溶菌酶，可以得到3.5g，溶菌酶纯品售价60元/1g左右。因此，进行溶菌酶的提取工艺研究，有着重大的科学意义和现实意义。4溶菌酶的提取工艺蛋清的组成成分蛋清又称蛋白，是一种胶体物质，约占

8、蛋重的45%～60%，颜色为微黄色。鸡蛋清实际分为四层，由外向内的结构是：第一层为外稀薄层，贴附在蛋清膜上，占整个蛋清的23.3%；第二层为外浓厚层（亦称中层浓厚蛋白层），约57.2%；第三层为内稀薄层，约占16.8%；第四层为系带膜状层（亦称内浓厚层），为一薄层，加上与之连为一体的两端系带，约占2.7%。水分蛋白质碳水化合物维生素和色素灰分脂质酶4.1直接结晶法优点：操作简单，原料便宜，设备投资小。最早应用于蛋清溶菌酶的工业生产，使产品的成本大大降低，为其医药应用作