肌肽精制工艺条件优化试验研究

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1、肌肽精制工艺条件优化试验研究【】目的对肌肽精制过程中的工艺条件进行试验研究。方法通过设计三因素三水平的正交试验，摸索优选最佳精制工艺条件。结果确定精制工艺参数活性炭用量为肌肽粗品的3%，脱色反应时间为30min，醇沉步骤乙醇用量为滤液量的120%。结论该方法重现性好、收率较高，适用于原料药的实际生产。　　【关键词】肌肽；精制；活性炭　　　　肌肽是一种天然小肽，由β-丙氨酸和L-组氨酸构成，是具有抗氧化作用的活性物质。近年来已通过合成手段获得肌肽，随着研究领域的不断深入，学者们发现肌肽通过抵抗氧化应激、重金属螯合等机制，抑制化学性修饰和大分子聚

2、合物的形成，从而调节全身各组织的蛋白质代谢。近年来医药领域研究工作证明，肌肽可用于预防缺血及再灌注引起的脑组织损伤〔1〕；治疗胃溃疡、烧伤、抗肿瘤〔2〕；并具有抗衰老、免疫调节作用；对眼局部治疗白内障的研究也逐渐显露头角〔3〕，并表现出对角膜组织代谢损伤和老年性白内障的功效。　　肌肽的药用作用明确，但目前在国内主要用于保健、化妆品、食品添加剂等方面，将其开发成药物有着广阔的应用前景和重要的临床意义。根据国家要求，肌肽作为原料药申报需要做大量的试验研究，精制工艺是关乎原料药质量的重要技术内容，以将原料药中的杂质降低到合理的限度以下。本文对肌肽的

3、精制工艺进行了优化及筛选，以期获得符合国家要求的精制工艺条件。　　1材料与仪器　　肌肽粗品、活性炭（四川三高生化股份有限公司）；乙醇（湖南尔康制药有限公司）；集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）；高效液相色谱仪（LC-2010C，日本岛津公司）；其余抽滤装置、电子天平等均为实验室常规仪器。　　2方法与结果　　2.1精制步骤将肌肽粗品溶解于蒸馏水中，加入一定量的活性炭，加热搅拌脱色，脱色后趁热过滤除去活性炭，于滤液中加入一定量的乙醇醇沉，充分析出后将醇沉物滤出、洗涤，经干燥和烘干后得精制品。　　2.2精制品中杂质含量的测定为了

4、检测精制过程对粗品中杂质的去除效果，对制得的精制品采用高效液相色谱法测定精制品中杂质的含量[4]。色谱条件为：流动相0.040mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调pH值至6.30）-乙腈（38：62）；色谱柱为NH2柱（200mm×4.6mm，5μm，资生堂公司）；流速1.0ml/min；检测波长210nm；柱温35℃。按主成分自身对照法计算杂质含量。　　2.3正交设计试验在对肌肽粗品的精制过程中，对精制效果有重要影响的因素有活性碳的用量（A）、脱色时间（B）和醇沉过程中乙醇量占滤液量的百分比（C），选择这三个因素进行正交设计，每因素3水平，分

5、别为1%、3%、5%，15、30、45min，80%、100%、120%、依照L9(34)正交表安排实验，以精制品总杂质含量为评价指标，筛选出最优的精制工艺。实验结果见表1。　　表1正交试验结果与分析　　2.4直观分析以精制品中的杂质含量为指标进行直观分析，杂质含量越少，则精制品的质量越好。极差R反映各因素对指标的影响程度，R值越大对杂质含量的影响越大，反之则影响越小。主次因素顺序确定为：A>B>C。其中A因素K1>K3>K2；B因素：K1>K3>K2；C因素：K1>K2>K3。确定较优精制工艺为A2B2C3。即活性炭用量为肌肽粗品的3%，脱

6、色反应时间为30min，醇沉步骤乙醇用量为滤液量的120%。　　3讨论　　本文采用正交设计试验优化了肌肽的精制工艺，并对优选出的工艺条件进行了验证试验。结果表明优化的精制工艺能够大幅度的降低肌肽粗品中的杂质含量，为肌肽的药用奠定了良好的基础。该方法重现性好、收率较高，易于操作控制，适用于原料药的实际生产。