临床药理学实验课件

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1、临床药理学实验临床药理学实验基本要求预习实验指导分组领用器械实验室卫生实验报告HPLC外标法检测血浆左氧沙星的浓度反相-高效液相色谱法测定人血浆双氯芬酸钠浓度病例讨论实验报告格式实验名称目的方法结果讨论实验一HPLC外标法检测血浆左氧氟沙星的浓度【实验目的】掌握血浆样品的预处理方法。掌握高效液相色谱外标法检测血浆药物浓度的原理。了解高效液相色谱仪的原理及应用。【实验步骤】1.标准曲线的制备1.5mLEP管7支，编号空白血浆0.5mL分别加入不同量的左氧氟沙星标准工作溶液，配成浓度相当于0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50、5.00μg/mL的血浆样品经预处理后，进样检

2、测测定峰面积值（A），以A与浓度C作线性回归，求出标准曲线方程。2.血浆样品的采集健康志愿者口服200mg盐酸左氧氟沙星胶囊分别在不同时间点抽取静脉血3mL，放入肝素化试管0.25h、0.5h、0.75h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、4.0h、6.0h、9.0h、12.0h、24.0h离心(3000转/分×10min)，取血浆待测3.血浆样品的处理（√）1.5mLEP2支，编号血浆样品0.5mL70%高氯酸30μL旋涡振荡20秒15000rpm离心10min取上清液20μL进样检测4.色谱条件色谱柱：ZORBAXEclipseXDB-C18（4.6×150mm，5μm，Agile

3、nt，USA）保护柱：XDB-C18保护柱（4.6×12.5mm，5μm，Agilent，USA）流动相：乙腈-水-2%冰醋酸（18：12：70，V/V/V）流速：1.0mL/min，柱温：20℃，检测波长：294nm，参比波长：380nm，检测灵敏度：0.1mAU。【结果】根据测得的A值和标准曲线，求出浓度。全实验室汇总，以时间t为横坐标，浓度C和lgC为纵坐标作图。时间：0.25h、0.5h、0.75h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、4.0h、6.0h、9.0h、12.0h、24.0h【讨论】左氧沙星样品预处理方法和检测方法药时曲线左氧沙星广谱抗菌作用：多数肠杆菌科细菌，金黄色

4、葡萄球菌等革兰阳性菌和肺炎支原体，肺炎衣原体。单剂量口服0.2g后，血药峰浓度（Cmax）约为1.6mg/L，达峰时间（Tmax）约为1小时。血消除半衰期（t1/2β）约为6小时。蛋白结合率约为30%～40%。组织和体液中的浓度与血药浓度之比约在1.1～2.1之间。主要以原形自肾排泄，在体内代谢甚少。生物样品的预处理：溶剂萃取法：乙醚、乙酸乙酯、正己烷、苯，旋涡混合后转移有机溶剂层并挥干，用流动相复溶后检测。蛋白沉淀法：乙腈、甲醇、高氯酸、三氯醋酸（蛋白沉淀剂），旋涡混合后高速离心一定时间，上清液可直接检测。高效液相定量方法内标法：内标法就是用在样品中定量加入要分析的物质，通过测得的实际样品

5、量和加入样品量的比值来定量所要分析的样品含量。外标法:用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。外标一点法和标准曲线法。内标法＋标准曲线法微生物检测法和高效液相检测法实验二反相高效液相色谱法检测人血浆中双氯芬酸钠的浓度【实验目的】掌握高效液相色谱内标法检测血浆药物浓度的原理了解高效液相色谱仪的原理及应用。【实验步骤】1.标准曲线的制备1.5mLEP管7支，编号空白血浆0.5mL分别加入不同量的双氯酚酸标准工作溶液，配成浓度相当于0.025、0.05、0.100、0.250、0.500、1.000、2.500、5.000mg/L血浆标准溶液

6、经预处理后，进样检测测定峰面积值（A），以A与浓度C作线性回归，求出标准曲线方程。2.给药及血样采集每人口服单剂量双氯芬酸钠栓剂100mg于给药前，给药后0.167h、0.333h、0.667h、1.0h、1.5h、2.0h、3.0h、4.0h、6.0h、8.0h、12.0h静脉取血3mL，放入肝素化试管离心(3000转/分×10min)，分离血浆注意：实验前晚禁食（禁食不禁水）12h，次日7:00排空膀胱后服药，给药2h后方可饮水，4h后进统一餐3.样品处理10mL具塞试管：血浆0.5mL，加人2mol/LHCL100μL，40μL内标液（吉非罗齐or卡马西平）。振荡30秒，加乙醚5.0m

7、L，混旋2min，静置10min将有机相4mL转移至10mL刻度离心试管中37°C水浴挥干，加流动相100μL复溶，进样20μL用内标法峰面积定量分析。4.色谱条件：色谱柱:HypersilC18柱(4.6mm×250mm，5um，Agilent，USA);保护柱:ezs柱(大连依利特科学仪器有限公司)流动相：甲醇：1.5%冰乙酸(72.5:27.5，v/v)流速：0.9mL/min；检测波长276nm；柱温