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时间:2018-10-11
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1、蛋白多肽类药物药代动力学分析方法研究进展作者:张琪 王广基 摘 要 通过查阅近期国内外有关文献10余篇,综述了现代分析方法在蛋白多肽类药物代谢动力学研究中的应用,重点介绍了生物检定法、同位素标记法、免疫学、色谱等方法的原理、特点、及发展状况。 关键词 蛋白质;多肽;药物动力学;生物检定法;同位素标记法;免疫学;色谱 文章编号:1005-8915(2000)02-0126-03TheProgressoftheAnalysisMethodofProteinPolypeptideDrugPharmacokinet
2、icsZhangQi WangGuangji(CenterofPharmacokinetics,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009)Abstract Areviewofapplicationofmodernanalysismethodsinstudyingthepharmacokineticsofproteinpolypeptidedrugispresentedwith16references.Thepaperemphasizestheprinciple,cha
3、racteristic,andprogressofbioassay,radioiodination,immunoassay,andchromatography.KeyWords Protein,Polypeptide,Pharmacokinetics,Bioassay,Radioiodination,Immunoassay,Chromatography 在国家确定的发展高新技术计划中,生物技术产品一直作为优先开发的领域之一。蛋白多肽类药物在实现产品的产业化过程中,受到诸多因素的制约,其中药物动力学的研究面临着更
4、高的要求。其主要原因是蛋白多肽类药物的结构特殊、用药量很小、生物体内有大量相似物质的干扰,这一切都使得该类药的分析方法不同于传统药物,大大增加了检测的难度。本文就目前进行该类药药物代谢动力学过程中所使用或发展中的几种分析方法做一概述。1 蛋白多肽类药物的分析方法1.1 生物检定法 由于蛋白多肽类药物多为有生物活性的物质,且生物活性不仅取决于药物的一级结构,与二、三级结构亦密切相关,故生物检定法是研究该类药物动力学独特而必需的方法。生物检定法有两个目的,直接测定体液中药物浓度及鉴定标记药物的生物活性。其方法主要可
5、分为两大类。 1.1.1 在体分析 常规的有胰岛素的小鼠血糖法等,另外还有根据各类蛋白多肽的生物活性不同而建立的各异的方法,如根据IL-8可将大量中性粒细胞从骨中动员出的性质[1]而建立的IL-8动员中性粒细胞家兔体内实验。这类方法最直观地反映生物活性,但涉及整体动物,费时费力,灵敏度不高,变异较大。 1.1.2 离体组织(细胞)分析 如NGF刺激鸡背根神经节增长,缩宫素的大鼠离体子宫法等。随着分子生物学的发展,许多特异性强,灵敏度高的依赖细胞株被建立,细胞培养已是最常用的方法。根据蛋白多肽与细胞相互作用的机理不
6、同,具体的操作亦有多种。如细胞增殖法(Proliferationassays),快速灵敏,但特异性稍差;抑制增殖法(Antiproliferationassays),检测系统简单、灵敏而专一;减少细胞损伤法(Cytopathiceffectreductionassays)[2],则是依据具有抗病毒活性的药物如干扰素,保护细胞不受病毒损伤,方法直观灵敏,但可能会受到多肽亚型的干扰。以上的方法都是以细胞数目的增减为量效指标,计数方法有直接计数法和间接计数法,后者包括MTT法,同位素(3H,14C)掺入法等。此外,还有
7、根据蛋白多肽与细胞间接作用进行检测,如与免疫检测联用的抗体诱导法[3],结合酶反应的酶诱导分解法[4]等。 总的说来,细胞培养法多具有灵敏特异,客观可靠的优点,但其不足也显而易见。·首先,生物检定法无法定量失去活性的小代谢物,无法示踪它们的体内动态;·其次,样品多存在于人或动物血清中,血清中内源物质的干扰以及可能存在的内源因子的交叉反应,影响了方法的专属性;·再者,启动生物过程常需阈量细胞因子从而降低了方法的灵敏度;·依赖株细胞长期培养易发生变异而影响检测的特异性。1.2 免疫学方法 免疫学方法是利用蛋白多
8、肽药物抗原决定簇部位的单克隆或多克隆抗体特异地识别被检药物,再以放射计数,比色等方法予以定量,即将特异的抗原抗体反应配以灵敏检测的方法。常用的方法有三种。 1.2.1 放射免疫法(RadioimmunoassaysRIA) 该法是被测药物(Ag),标记药物(多为125I-Ag)与抗体(Ab)的竞争性结合反应,方法的特异性取决于抗原抗体的亲和力及标记药物的纯度,与生物检定法
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