人结直肠癌组织中b7和icos分子mrna的表达

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1、人结直肠癌组织中B7和ICOS分子mRNA的表达【关键词】结直肠肿瘤　　【Abstract】AIM:ToobservethetumorassociatedB7familymoleculesmRNAexpressiononhumancolorectalcanceroustissuebyinsituhybridization.METHODS:ThemRNAexpressionpatternsofcancerassociatedB71,B7H1,B7H2andICOSmRNAexpressionin22specimensofhumancolorectalcanceronitoredby

2、thetechniqueofinsituhybridization(ISH)RNAorinfiltratinglymphocytes(TILs).ThemRNAexpressionlevelofthesemoleculesintumorcellsilymoleculesandthesex,age,differentiationstatusofcancerandregionallymphnodesmetastasisofthepatients.CONCLUSION:Th2cytokinepredominantintumormicroenvironmentmayberelatedto

3、theexpressionofB7H1andB7H2cosignalmoleculesontumorcellsandTILs.　　【Keys;B7;ICOS;tumorimmunity;immuneevasion　　【摘要】目的:通过原位检测B71，B7H1，B7H2和ICOS等分子mRNA在结直肠癌细胞及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中的表达，以期探讨肿瘤微环境中Th2型细胞因子表达上调的可能机制.方法:采用原位杂交技术，用地高辛标记的寡核苷酸探针检测了22例人结直肠癌组织B71,B7H1,B7H2和ICOS分子mRNA表达状况，并结合临床特点加以综合分析.结果:肿瘤组织和肿瘤浸润

4、淋巴细胞除表达B71外，均可见B7H1,B7H2和ICOSmRNA表达，但肿瘤细胞的表达水平显著高于TIL的表达水平，具有显著性差异(P<0.05)；B7家族分子在癌细胞和TIL中的表达均与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、有无区域淋巴结转移无关，在TIL中B7H1表达与肿瘤浸润深度有关（P<0.05）；在癌细胞中则与之无关（P=0.155）；在癌细胞和TIL中B7H1和ICOS分子表达与远处转移之间具有显著性差异（P均<0.01）.结论:肿瘤细胞和TIL表达B7H1，B7H2和ICOS分子可能与肿瘤微环境中Th2型细胞因子占优势有关.　　【关键词】结直肠肿瘤；B7

5、；可诱导共刺激因子;肿瘤免疫；免疫逃逸　　0引言　　肿瘤细胞逃逸宿主免疫反应一直是研究的热点.T淋巴细胞活化双信号机制的确立使人们以为肿瘤组织中的浸润免疫潜能细胞不活化是因为缺乏共刺激信号所致的免疫无能，加之有动物实验也证明B7共刺激分子基因修饰的肿瘤细胞可被荷瘤宿主排斥［1］，研究证实肿瘤细胞也表达B71,B7H2等共刺激分子，提示它们可能不是肿瘤免疫逃逸最主要的机制［2］.我们利用B71，B7H1，B7H2和ICOScDNA探针，原位杂交技术，分析人结直肠癌组织B7家族共刺激分子表达状况，探讨其与肿瘤病理分期的关系如下.　　1材料和方法　　1.1材料　　1994/1996年我

6、院外科根治性切除的结直肠癌患者的组织标本22例，术前未行放、化疗及免疫治疗.所有标本均经病理证实，40g/L中性甲醛固定、常规石蜡包埋，5μm连续切片，DEPC水展片，裱贴于涂有APES的玻片上.65℃烤片过夜，-70℃保存备用.应用Primer3软件设计针对mRNA的寡核苷酸探针，探针的特异性均经BLAST软件测试，显示具有良好的特异性.Primer3：.genome.it.edu/cgibin/primer/Primer3，BLAST：.ncbi.nlm.gov/cgibin/BLAST.4种探针序列分别为：B71：5′CATGAAGCTGTGGTTGGTTG3′;B7H1：

7、5′TGCTTGTCCAGATGACTTCG3′;B7H2：5′CCATCGCTCTGACTTCCTTC3′;ICOS：5′TTCAGCTGGCAACAAAGTTG3′.　　1.2方法　　探针用digoligonucleotidtailingkit(BoehrinyerMainheim)标记，严格按照产品说明书进行，探针活性为1.56mol/LmRNA原位杂交:42℃预杂交2h→42℃杂交22h→梯度SSC清洗→地高辛抗体1h→NBTBCIP显色→封片镜检.整个操作均在无RNA酶