艾滋病梅毒乙肝实验室检测技术ppt课件

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1、艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术白志永2015.12.30艾滋病抗体检测及样品处理实验室质量管理生物安全质量控制梅毒乙肝检测要点艾滋病抗体检测及样品处理一、HIV抗体检测筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验快速检测（RT）（建议配备合格的快速检测试剂，灰区。）二、筛查程序初筛和复检流程（图1）2、检测程序五、样品的处理1样品的保存用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃，一周以上应存放于-20℃以下。2.样品的运送（例）（1）应符合生物安全要求；(2)应采用三层容器对样品进行包装。第一层容器

2、：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签、联系方式，还应易于消毒。(3)用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。质量控制一、艾滋病抗体检测的统计学室内质量控制1、试剂盒内部对照即试剂盒提供的阳性和阴性对照血清。用于判断实验的有效性，不能作为室内质控品使用，内部对照结果无效，必须重新试验。2、室内质控品为非试剂盒组

3、份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2～3倍为宜。作用：判断该批临床样品检测的有效性，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。二、统计室内质控的主要表示方法—建立质控图最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，下面以ELISA方法检测HIV抗体为例，描述建立质控图步骤：2、绘制质控图（a）在常规条件下，对同一批血清连续测定20次（天）或以上，获得一组S/CO值，求均数（）和标准差（s）,超出2s或3s的数据不应删除。（

4、b）将均值（）和标准差（s）分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵座标（Y轴），每一批次试验作横座标（x轴），绘制质控图。（c）从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。3、质控规则及其使用质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，目前有许多质控规则，常用的是12S和13S规则。（a）告警（12S）：当外部质控品的S/CO值超出+2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。（b）失控（13S）：当外部质控品的S/CO值超出+

5、3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品稳定性下降所致。（c）漂移：连续几次（3～5次）外部质控品的S/CO值都落在均值的一侧则称为漂移，提示实验条件发生了较大的变化。（d）趋势：连续几次（5～7次）外部质控品的S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。艾滋病实验室生物安全一、HIV的生物危害第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病原微生物。二、HIV相关检测的生物安全级别HIV抗体检测应在符合Ⅱ级生物安全实验

6、室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。三、生物安全保证措施1、建立安全制度艾滋病检测实验室应建立下列安全制度(1)实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（S-SOP）。(2)意外事故处理预案，主要是生物安全意外事故。(3)信息安全及保密制度：（例）2、培训和管理3、个人保健和防护4、安全操作5、实验室的清洁和消毒工作完毕应对工作台面消毒，推荐用0.1～0.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作过程中如有样品、检测试剂外溅，应及时消毒。如有大量高浓度的传染性液体溅出，在清洁之前应先用1%的次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦

7、净。离心样品时要使用密闭的罐和密封头，防止离心时液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。四、污染物处理1、艾滋病实验室产生的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，经高压消毒后再进行处理或废弃。2、艾滋病检测实验室常用的消毒方法（1）物理消毒方法a高压蒸汽消毒，121℃，保持15～20min;b干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持2～3h。（2）化学消毒方法含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000～5000mg/L）、75%乙醇、2%戊二醛（3）艾滋病检测实验室物品常用的

8、消毒方法a、废弃物缸：5000mg/L次氯酸钠。b、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。c、溢出物：5