高效液相色谱法测定补脾益肠胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量

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1、高效液相色谱法测定补脾益肠胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量　　【关键字】补脾益肠胶囊；补骨脂素；异补骨脂素；高效液相色谱法　　【Abstract】OobjectiveToestablishthemethodfordeterminationofpsoralenandisopsoraleninBupiYichangCapsules.MethodsTheHederaODSC18(250mm×4.6mm,5μm)obilephaseconsistedofmethanol-l/min.Thedetection.RESULTSThelinearrangeofpsorale

2、npleandaccuratemethodforthequalitycontrolofBupiYichangCapsules.　　【Keym×4.6mm,5μm)色谱柱；KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BS124S电子天平（德国赛多利斯）。　　1.2试药补脾益肠胶囊浸膏（深圳三九医药业股份有限公司提供），补骨脂素（批号：110739-200613，中国药品生物制品检定所），异补骨脂素（批号：110738-200511，中国药品生物制品检定所），色谱纯甲醇，纯净水。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　流动相：甲醇∶水（58∶42）；流速：

3、0.8ml/min；柱温：室温；检测波长：245nm[5]。　　2.2供试品溶液的制备　　取补脾益肠胶囊浸膏1g，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇约45ml，超声30min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液10ml即得。　　2.3对照品溶液的制备　　分别精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每毫升各含0.1mg的对照品溶液，临用时稀释到适当浓度。　　2.4空白对照试验　　按本制剂的处方、工艺提取不含补骨脂药材的浸膏，按上述2.2方法制备阴性对照溶液。照上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各20μl，分别注入液相色

4、谱仪。　　结果见图1。补骨脂素的保留时间为10.4min，异补骨脂素的保留时间为11.7min，二者的分离度为3.0，理论塔板数均在15000以上，表明补骨脂素和异补骨脂素能够良好的分离，且方中的其他成分不干扰补骨脂素和异补骨脂素的测定。　　　　图1HPLC图谱　　A.对照品溶液（1.补骨脂素2.异补骨脂素）B.供试品溶液C.阴性对照溶液　　　　2.4方法学考察　　2.4.1线性关系的考察　　分别取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，精密称定后，以甲醇溶解并定容于同一容量瓶中制成每1ml中各含补骨脂素和异补骨脂素100μg和200μg的混合对照品溶液作为储备液。精

5、密吸取储备液，以甲醇稀释配制成补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为1.0、2.0、5.0、8.0、10.0、12.0、15.0；1.9、3.8、5.7、7.6、9.5、11.4、13.3μg/ml的溶液，分别吸取上述对照品溶液20μl，按上述色谱条件进行测定。以峰面积A为纵坐标，溶液浓度C(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。其中，补骨脂素的标准曲线为A=209056C+3485.1，r=0.9998，线性范围为0.020~0.30μg；异补骨脂素的标准曲线为A=201857C－33777，r为0.9999，线性范围为0.038~0.266μg。　　2

6、.4.2精密度考察　　取对照品溶液，按上述色谱条件分别重复进样5次，结果补骨脂素RSD为0.20%，异补骨脂素RSD为0.23%，表明该方法的精密度良好。　　2.4.3稳定性考察　　取新鲜配制的供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10、24h进行测定，结果补骨脂素RSD为1.10%，异补骨脂素RSD为1.45%，说明供试品溶液在24h内是稳定的。　　2.4.4重复性试验　　精密称取补脾益肠胶囊肠溶浸膏5份，按2.2方法配成供试品溶液，测定含量，结果补骨脂素的平均含量为2.663mg/g，RSD为2.16%，异补骨脂素的平均含量为1.439mg/g，RSD为2.

7、79%，说明重现性较好。　　2.4.5加样回收试验　　精密称取已知含量的样品5份，分别精密加入补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，按2.2方法制备5份，分别进样，测定。结果补骨脂素平均回收率为100.61%，RSD为1.86%(n=5)，异补骨脂素平均回收率为100.76%，RSD为1.60%(n=5)，见表1。　　　　　　3讨论　　在供试品溶液的制备过程中，对超声时间进行了考察，在超声0、10、30min后样品中补骨脂素的含量分别为2.363、2.534、2.6mg/g；异补骨脂素的含量分别为1.221、1.318、1.4mg/g，再延长超声时间，补骨脂素和异

8、补骨脂素的含量不再增加，因此供试品溶液