TRIM59和COMMD9促进非小细胞肺癌增殖和迁移的分子机制研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：355628813020南昌大学博士研究生学位论文TRIM59和COMMD9促进非小细胞肺癌增殖和迁移的分子机制研究TRIM59andCOMMD9promotesproliferationandmigrationinnon-smallcelllungcancer詹伟华培养单位（院、系）：生命科学学院指导教师姓名、职称：王建斌教授申请学位的学科门类：理学专业领域名称：生物学论文答辩日期：2016年12月答辩委员会主席：评阅人：2016年12月12日一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导

2、下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据

3、库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目TRIM59和COMMD9促进非小细胞肺癌增殖和迁移的分子机制研究姓名詹伟华学号355628813020论文级别博士þ硕士□院/系/所生命科学学院专业生物学E_mail8

4、67839532@qq.com备注：þ公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）摘要摘要第一部分TRIM59促进非小细胞肺癌增殖和迁移研究目的：TRIM家族是一类在炎症、免疫、抗病毒和癌症发生发展过程中有重要作用超家族蛋白。作为TRIM家族的一员，之前有文献报道TRIM59通过泛素化p53促进胃癌的发生发展，但是TRIM59在非小细胞肺癌（NSCLC）中的生理学功能和作用机制并不清楚。本课题通过QPCR方法，得到TRIM蛋白家族成员在非小细胞肺癌中的mRNA表达情况。进一步探讨TRIM59对非小细胞肺癌细胞生长、迁移和细

5、胞周期的影响及其作用机制。研究方法：1、用QPCR方法筛选4株非小细胞肺癌细胞（H1299，A549，SPC-A1和H292）相对于正常人类支气管上皮细胞（HBE）中差异表达的TRIM基因。2、在蛋白水平上验证各株细胞中TRIM59表达情况，并且检测其在14种人类正常组织中的表达情况。3、在转染TRIM59特异性siRNA情况下，通过饱和密度实验、低血清实验、克隆集落形成实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和免疫荧光实验，检测干扰TRIM59表达对非小细胞肺癌细胞生长、迁移和细胞周期的影响。4、降低TRIM59表达水平，

6、然后进行QPCR实验，免疫蛋白印迹实验，检测细胞周期蛋白和p53蛋白表达情况。研究结果：1、相比于HBE细胞，在4株NSCLC细胞中TRIM3、TRIM7、TRIM14、TRIM16、TRIM21、TRIM22、TRIM29、TRIM59、TRIM66和TRIM70高表达，TRIM4、TRIM9、TRIM36、TRIM46、TRIM54、TRIM67和TRIM76低表达。而TRIM17、TRIM40、TRIM42、TRIM43、TRIM48、TRIM49、TRIM50、TRIM51、TRIM60、TRIM63、TRIM64和TRIM7

7、7在NSCLC细胞和HBE细胞中未检测到。2、相比于HBE细胞，TRIM59蛋白在4株NSCLC细胞中高表达。TRIM59I摘要在骨髓和脾脏中高表达，在肺和肌肉中低表达，而在其它正常组织（脂肪、血液、直肠、心脏、肾脏、肝脏、淋巴结、皮肤、胃和睾丸）中未检测到。3、干扰TRIM59蛋白表达明显抑制NSCLC细胞生长、克隆集落形成、迁移，并且G2/M期细胞增多，PCNA蛋白表达降低。4、干扰TRIM59蛋白表达，细胞周期蛋白CDC2、CCNA2、CCNB1、CCNB2和CDC25C的mRNA水平降低，其中CDC2和CDC25C蛋白水平也降

8、低，而CCNB1的蛋白水平没有变化。在4株NSCLC细胞和HBE细胞中干扰TRIM59表达，发现H1299细胞中未检测到p53表达，HBE、H292和A549细胞中p53表达没有改变，而在SPC-A1细胞中p53蛋白水平