高效液相色谱法测定风湿定片中丹皮酚的含量

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1、高效液相色谱法测定风湿定片中丹皮酚的含量【摘要】目的：对风湿定片中的丹皮酚进行含量测定。方法：采用HPLC法，以DiamonsilC18为色谱柱，以甲醇水（50∶50）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为274nm。结果：丹皮酚在6～70μg/mL范围内线性关系良好，相关系数r=0.9999；平均回收率为99.60%，RSD=1.23%(n=6)。结论：本方法结果准确，重现性好，可用于风湿定片中丹皮酚的含量测定。【关键词】丹皮酚；风湿定片；高效液相色谱；含量测定〔Abstract〕Objective:Toestablishanassaymethodtode

2、terminepaeonolinFengshidingtablets.Methods:ByHPLCployedonsilC18asthecolumn,methanolandobilephase,thefloL/minandthedetection.Results:Thecalibrationcurveofpaeonol6μg/mLto70μg/mLonsilODS色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇水（50∶50）；流速：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：274nm；进样量：20μL。2.2对照品溶液的制备精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇

3、制成每1mL中含对照品20μg的溶液，即得。2.3供试品溶液的制备取本品10片，研细，约取0.2g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入甲醇溶解定容后滤过，取续滤液，即得。2.4阴性对照溶液的制备取除徐长卿以外的药材，按处方及制备方法制得不含徐长卿的阴性片若干。取阴性片10片，研细，约取0.2g,精密称定，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。2.5系统适应性试验按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别注入色谱仪，结果见图1。实验结果表明，阴性对照溶液中的组分不干扰丹皮酚的测定。理论板数按丹皮酚峰计不低于3000。2.6线性关系考察精密称取丹皮酚对

4、照品11.9mg，置100mL量瓶中，加甲醇适量，使溶解，稀释至刻度，摇匀。分别精密移取1.25、2.5、5.0、7.5、10.0、15mL于25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别吸取20μL，注入液相色谱仪中，将样品浓度与峰面积进行回归处理，得回归方程：Y=100.22X+25.619，r=0.9999，结果表明，本方法中丹皮酚在6～70μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好。2.7精密度试验吸取对照品溶液重复进样5次，测得峰面积的RSD为0.88%，结果表明，精密度良好。2.8稳定性试验在室温条件下，取风湿定片（批号：050601）样品粉末约0.15g，精密称

5、定，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液。精密吸取供试品溶液20μL，按上述色谱条件，在0、2、4、8、12、24h分别按上述色谱条件进样测定，测得峰面积的RSD为0.24%(n=6)。结果表明，供试品溶液在24h内稳定。2.9重复性试验取风湿定片（批号：050601）样品粉末约0.2g，精密称定，共6份，按供试品溶液制备方法制得6份供试品溶液；按上述色谱条件测定，计算供试品中每粒含丹皮酚分别为0.61、0.60、0.59、0.60、0.58、0.60mg（RSD为1.73%），表明本文方法重现性较好。2.10回收率试验称取丹皮酚对照品约10mg，精密称定，置100mL容

6、量瓶中，加甲醇定容，混合均匀，备用。取风湿定片（批号：050601）样品粉末约0.1g，精密称定，共6份，置25mL具塞锥形瓶中。依次分别精密加入上述丹皮酚对照品溶液适量，按上述方法测定，结果见表1。2.11样品测定3批样品各取2份，按样品测定方法进行测定，记录峰面积，按外标法计算丹皮酚的含量，结果见表2。3讨论3.1波长的选择用紫外分光光度计对丹皮酚对照品溶液作220～320nm波长扫描，其最大吸收波长为274nm，选择此波长作为检测波长。表1样品回收率测定结果表2风湿定片中丹皮酚含量3.2流动相的选择对HPLC分析时流动相的组成和配比，参考了药典等文献，比较了甲醇

7、水（45∶55）〔1〕、甲醇水（50∶50）〔2,3〕、甲醇水（55∶45）〔4〕、甲醇水（60∶40）〔5〕、甲醇水（70∶30）〔6〕、甲醇水（80∶20）〔7〕等不同流动相，并针对本制剂处方的特点进行了探索。结果以甲醇水（50∶50）比例最佳，峰形与柱形较好，分离效果较好，故选用甲醇水（50∶50）作为流动相。本文建立了风湿定片中丹皮酚含量测定的高效液相色谱法，该方法简便、灵敏、快速、准确，可以作为风湿定片质量控制标准。【