硫酸苯酚法测可溶性总糖含量

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1、硫酸苯酚法测可溶性总糖含量一、测定原理可溶性糖主要有能溶于水及乙醇的可溶性单糖和寡聚糖。糖在浓硫酸作用下脱水生成糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚所合成一种橙红色化合物，在10~100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，因此可用比色法在此波长下测定。硫酸苯酚法可以用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高且不受蛋白质存在的影响，产生的颜色稳定时间160min以上。二、实验试剂1．90%苯酚溶液：称取90g苯酚，加蒸馏水定容至100ml。2．9%苯酚溶液：取3

2、ml90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配先用。3．浓硫酸（比重1.84）4．1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g，加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。5．100μg/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液lml加入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。三、仪器设备分光光度计，50ml比色管7支，移液管四、实验步骤1．标准曲线的制作取20ml刻度试管6支，从0～5分别编号，按表1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1ml9％

3、苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20s时间加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在室温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。表一试剂管号012345100μg/L蔗糖标准液（ml）00.20.40.60.81.0蒸馏水（ml）2.01.81.61.41.21.0蔗糖量（μl）0204060801002．可溶性糖的提取称取样品0.1～0.3g,放入1支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料

4、薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。3．测定吸取0.5ml样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，计算测试样品中糖含量。四、结果计算可溶性糖含量（％）X=﹙C×D／M﹚×100X———每百克样品总糖含量C———在标准曲线上查得的糖含量（g）D———稀释倍数M———样品重量(g)