高效液相色谱法测定喘平滴丸中东莨菪碱的含量

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1、高效液相色谱法测定喘平滴丸中东莨菪碱的含量李晓燕，冯中，吴燕红，朱盛山，霍务贞【摘要】　　目的建立测定喘平滴丸中东莨菪碱含量的高效液相色谱法。方法采用ZORBAXSB-C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱，以甲醇－0.001mol·L-1磷酸（70∶30）（流动相含0.02mol·L-1十二烷基硫酸钠）为流动相，检测波长：216nm，流速：1.0ml·min-1，外标法定量。结果东莨菪碱在0.0285～0.285μg范围内呈线性关系，方法回收率为98.86%（n=6），RSD为2.54%。结论此法简便、准确，重复性好，可用于喘平滴丸中东莨菪碱含量测定。【关键词】高效液相色谱法喘

2、平滴丸东莨菪碱　　喘平滴丸由麻黄、洋金花等中药组成的中药复方制剂。其中洋金花的主要化学成分东莨菪碱，有显著的中枢抑制、麻醉作用，一般剂量就能消除情绪激动，使人产生倦意，进入无梦的睡眠状态，产生“健忘”等症，严重者嗜睡、昏迷，最后死于呼吸中枢抑制或麻痹，呼吸和循环衰竭。方中洋金花处方量虽然比例小，为了该复方制剂的用药安全，本课题组对该复方制剂中微量的东莨菪碱进行含量监控，为该药的安全使用提供数据参考。　　1仪器与试药　　1.1仪器　　Agilent1100高效液相色谱仪系列(G1311A四元泵、G1313A自动进样器、G1314A-Vm×250mm，5μm），SN:USCL017850，BP

3、211D电子分析天平(Sartorius)。　　1.2试药　　甲醇为色谱纯试剂，水为三蒸水，其它试剂均为分析纯。氢溴酸东莨菪碱对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号：100049-200308)，喘平滴丸3批（本所研制，批号：20070516，20070518，20070520）。　　2方法与结果　　2.1溶液的制备　　2.1.1对照品溶液的制备取氢溴酸东莨菪碱对照品约10mg，精密称定，置50ml容量瓶，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀,得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1.0ml,置10.0ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。即得（0.0214mg·ml-1）。　　2.1.2供试品溶

4、液的制备取本品20丸，精密称定，置具塞锥形瓶中，加10ml0.01％盐酸超声溶解，用浓氨水调pH值至9，转移入梨形分液漏斗中，用氯仿（15，15，10，10ml）分次萃取，取氯仿层至蒸发皿中，用甲醇溶解转入10ml量瓶中，滤过（0.22μm），取续滤液即得。　　2.1.3阴性样品溶液的制备按处方工艺制备缺洋金花的浸膏，依供试品溶液制备方法制备。　　2.2色谱条件及系统适用性试验色谱柱为ZORBAXSB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相甲醇－0.001mol·L-1磷酸（流动相含0.02mol·L-1十二烷基硫酸钠）（70：30），检测波长216nm，流速1.0ml·min-

5、1。在上述色谱条件下，分别吸取对照品溶液12μl，供试品溶液和阴性对照溶液各3μl，注入液相色谱仪，色谱图见图1～3。供试品与氢溴酸东莨菪碱对照品相同的保留时间有一对应色谱峰，阴性对照溶液在对应位置无干扰；以氢溴酸东莨菪碱计算，理论塔板数在3000以上。分离度＞1.5，故此色谱条件满足测定要求。　　2.3线性关系考察精密吸取上述对照品溶液（0.0214mg·ml-1）1，2，4，8，12，16，20μl进样，测定其峰面积积分值，以进样量X（μg）为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，氢溴酸东莨菪碱回归方程为：Y＝743.95X+3.47867，r＝0.9999。结果表明氢溴酸东莨

6、菪碱在0.0285～0.285μg范围内线性关系良好。　　2.4精密度实验精密吸取供试品溶液3μl，按上述色谱条件重复进样6次，测定其峰面积，RSD=0.71％，表明精密度良好。　　2.5重复性实验对同一批样品（批号20070516）按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试液，每份进样3次，3μl/次，测得峰面积并计算每丸平均含量，RSD=2.31%，表明本法重复性较好。　　2.6稳定性实验取新制备的供试品溶液（批号20070516），按上述色谱条件于0，1，2，4，8，12h分别进样3μl，测定其峰面积，RSD为1.73％，表明本品在12h内稳定性较好。2.7回收率实验精密称取已知含量的

7、同一批样品（20070516，含量为0.08495%）6份，每份8丸，分别精密加入0.8ml的东莨菪碱对照品溶液（0.285mg·ml-1），按供试品溶液制备项下操作，最后定容为10ml，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。表1氢溴酸东莨菪碱回收率测定结果（略）　　2.8含量测定及限度取本品3批,每批分别取3份样品，按“2.1.2”项下方法制备供试液，每份样品平行进样3次，按拟定的含量测定方法测定。结果见表2。表2样品