汉防己甲素对人脐静脉内皮细胞vegf mrna和flk1蛋白的影响

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1、汉防己甲素对人脐静脉内皮细胞VEGFmRNA和Flk1蛋白的影响【摘要】目的观察汉防己甲素对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(Humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC)中血管内皮生长因子(VascularendothelialgroRNA和血管内皮生长因子受体-2(Fetalliverkinase，Flk1)蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法应用MTT法测定不同浓度(10-3、10-4、10-5、10-6M)Tet对HUVEC的抑制作用，用免疫组织化学和原位

2、杂交方法分别检测血管内皮生长因子受体-2(Flk1)蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA在血管内皮细胞中的表达。结果(1)Tet能抑制HUVEC增殖且具有量效依赖关系;(2)Flk1蛋白、VEGFmRNA在1640对照组、Tet实验组中的表达率分别为(0.742±0.057，0.445±0.066)，(0.596±0.047，0.324±0.049)。Tet明显降低Flk1蛋白、VEGFmRNA在内皮细胞中的表达(P<0.05)。结论汉防己甲素下调人脐静脉内皮细胞中VEGFmRNA和Flk1

3、蛋白的表达，从而抑制人脐静脉内皮细胞增殖。【关键词】汉防己甲素;人脐静脉内皮细胞;血管内皮生长因子受体;血管内皮生长因子　Flk1proteinandVEGFmRNAintetrandrineonhumanumbilicalveinendothelialcells　　LIDai,LIQing-chun.DepartmentofOphthalmology,XianningCollege,Xianning437100,China　　[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheinh

4、ibitoryeffectoftetrandrine(Tet)ontheVEGFmRNAandFlk1inthethirdpassagehumanumbilicalveinendothelialcell(HUVEC)invitroanddiscussthedrugeffectsofTetrandrineinanti-angiogenesis.MethodsCulturedHUVECmunochemistrytoobservetheexpressionofFlk1andVEGFmRNAinedbyutli

5、zinginsituhybridization(ISH)inculturedHUVEC.Results(1)Tet(10-3、10-4、10-5、10-6M)significantlysuppressedtheproliferationofHUVECinvitroandshoRNAinTet-treatedgroupeconcentrationscansuppresstheexpressionofFlk1andVEGFmRNAinculturedHUVEC,andinhibitHUVEC'sprolif

6、erativeactivity.Tetrandrineisapotentantiangiogenicagent.　　[Keyanumbilicalveinendothelialcell;Flk1;VEGF　　眼部新生血管是许多种眼科疾病的常见并发症之一,常导致视力减退或盲，而血管内皮细胞生长因子(VEGF)在血管生成过程中起着重要作用[1],因此近年来,新生血管研究的体外实验大多都集中在防治血管内皮细胞生长因子和其特异性受体的相关研究上。汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)是中药粉防己的有效单体

7、成分,我们的实验已经证实，Tet具有抑制人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC)增生的作用[2]，本实验进一步观察Tet对HUVEC中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和血管内皮生长因子受体-2(Flk1)蛋白表达的影响，为探讨其作为抗眼部新生血管形成药物提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1实验仪器CO2培养箱、超净工作台、高速离心机、酶标仪(DG3022A型)、倒置相差显微镜。　　1.2主要试剂Tet(同济医科大学提供)、碘化丙啶、MTT

8、、RPMI1640小牛血清RNase0.25%胰蛋白酶，EDTAHanks液(同济医科大学免疫教研室提供);兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体、鼠抗人Flk1——受体单克隆抗体(中山试剂公司提供)。VEGF原位杂交试剂盒(博士德试剂公司)、SABC试剂盒，DAB显色试剂盒(中山试剂公司提供)。　　1.3HUVEC的培养　　1.3.1原代内皮细胞的培养无菌条件下,取分娩新鲜胎儿脐带(不少于20cm)。按文献[3]方法,培养液为1640培养液(内含20%