二步聚合酶链反应检测皮肤t细胞淋巴瘤的t细胞受体基因重排.docx

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1、二步聚合酶链反应检测皮肤T细胞淋巴瘤的T细胞受体基因重排二步聚合酶链反应检测皮肤T细胞淋巴瘤的T细胞受体基因重排中华皮肤科杂志1998年第4期第31卷论著作者：丁铁钢　邱丙森　JackLongley单位：美国耶鲁大学医学院皮肤科(丁铁钢，JackLongley)；上海医科大学皮肤病学研究所皮肤病理研究室(邱丙森)关键词：聚合酶链反应；T细胞受体；基因重排；皮肤T细胞淋巴瘤【摘要】　目的　应用二步聚合酶链反应(PCR)检测皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)的T细胞受体(TCR)基因重排，提高其准确性和特异性，并应用已知重排的cDNA序列，推测该病患者的特异肽链顺序，为免疫治疗提供新线

2、索和途径。方法　先用TCR基因重排区域以外的部分为引物，做10～30个循环扩增。取得一定数量的cDNA，作为模板，再经30～40个循环扩增，获得较纯的cDNA。然后将此产物放入质粒，进一步分析DNA序列。按照分析结果，制备出特异的分子探针，对二步PCR扩增产物进行分子杂交，推测出患者的特异性肽链顺序。结果　以Vβ8为特殊引物所显示的反应带明显，用Vβ8顺序制成的分子探针杂交，示明显的特异性结合。特异性分子探针只与CTCL患者的cDNA杂交，与对照组标本不发生交叉反应。结论　二步PCR可准确地检测CTCL的TCR基因重排，其特异性强，并可在此基础上应用已知重排的cDNA序列推测

3、该病患者的特异性肽链，为免疫治疗提供新线索和途径。TwoStepPolymeraseChainReactionDetectingtheT-CellReceptorGeneRearrangementinCutaneousT-CellLymphomaDingTiegang*,QiuBingsen,JackLongley.*DepartmentofDermatology,MedicalCollege,YaleUniversity,USA【Abstract】　Objective　Atwosteppolymerasechainreaction(PCR)strategywasusedto

4、amplifycopyDNAscorrespondingtothespecialregionoftheT-cellreceptor(TCR)β-chain.MethodsandResultsWiththistechnique,adominantTCRgenerearrangementthatusedtheβ8variableregiongenesegmentwasidentifiedinapatientwithcuteneousTcelllymphomaanditssequencedeterminedfrommultipleindependentlygeneratedsubc

5、lonalPCRproducts.AnoligonucleotidecorrespondingtothehighlyvariablejunctionalregionoftheclonallyexpandedTCRgenerearrangementwassynthesizedandusedforfurtherconfirmingstudies.Finally,fromthesequencedataobtained,apeptidecorrespondingtotheβ-chainjunctionalregionsequenceofthepatient′sclonallyexpa

6、ndedT-cellswasgenerated.ConclusionPreliminarystudiesusingthispeptideindicatethatitisantigenicandmaypotentiallybeusefulindevelopingapatient-specifictumourvaccine.KeyWords　PolymerasechainreactionT-cellreceptorGenerearrangementCutaneousT-celllymphoma网址：www.jxdyf.com第4页，共4页T细胞在发生肿瘤的过程中，像B细胞的免疫球

7、蛋白基因一样，也发生T细胞受体(TCR)基因重排［1］。研究TCR基因重排，可提供对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)的起因、发病机理、早期诊断、监视病情和治疗的认识与依据。随着聚合酶链反应(PCR)技术的开展，为CTCL基因重排的研究开拓了新途径，但因标本的来源，特别是自从福尔马林固定、石蜡包埋的切片中提取的RNA或DNA的数量和质量均极受限，若以这样的标本进行PCR扩增，其产物难免不能出现较多、较重的背景反应，结果常难于分析。为此，我们应用二步PCR法检测一例CTCL患者的TCR基因重排，获得满意的效果。