反相高效液相色谱法测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量

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1、反相高效液相色谱法测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量郑晓珂，赵献敏，王彦志，魏悦，郭永慧，冯卫生【摘要】　　目的建立测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为AgilentZORBOXSB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸(40∶60)，柱温30℃；流速为0.8ml·min-1；检测波长337nm。结果阿曼托双黄酮含量为1.197%，平均回收率为99.30%，RSD=0.98%(n=9)，线性范围0.1～0.6μg·ml-1(r=0.9998)。结论该法快捷、灵敏、准确，可作为评价卷柏

2、药材质量的参考依据。【关键词】卷柏阿曼托双黄酮高效液相色谱法　　卷柏为卷柏科植物卷柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Sping或垫状卷柏Selaginellapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim)的干燥全草，具有活血通经功效，主要用于经闭痛经、症瘕痞块、跌扑损伤、崩漏、便血、脱肛等〔1〕病症。根据文献报道〔2～4〕，卷柏中主要含有阿曼托双黄酮、新柳杉双黄酮等化合物，具有抗脂质过氧化和清除自由基的作用〔5〕，对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用〔6〕，其中阿曼托双黄酮的含量最

3、大。采用反相高效液相法对卷柏药材指纹图谱研究的报道已见，但未见不同产地卷柏药材中阿曼托双黄酮含量测定的报道。本研究采用高效液相色谱法测定了全国10批不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量。　　1仪器与试药　　1.1仪器　　岛津UV-2201型紫外分光光度计；ShimadzuLC-10AT型高效液相色谱仪；SPD-10A型紫外检测器；AB204-N万分之一电子天平；AE240十万分之一电子天平；DZKariscina(Beauv.)Sping的全草。阿曼托双黄酮为本实验室自制，纯度达到99%以上。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。　　2方法

4、与结果　　2.1色谱条件及系统适应性实验　　色谱柱为AgilentZORBOXSB-C18(250mm×4.6mm，5μm)。流动相为乙腈-0.2%磷酸（40∶60）。流速0.8ml·min-1；检测波长337nm；柱温30℃；进样量10μl。测定阿曼托双黄酮对照品溶液和卷柏药材供试品溶液，色谱图见图1。如图1所示，阿曼托双黄酮与相邻杂质峰的分离度大于2，理论塔板数按阿曼托双黄酮峰计算大于3000。　　2.2对照品溶液的制备　　精密称取干燥恒重的对照品2.50mg，置50ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔

5、滤膜过滤，作为对照品溶液（50μg·ml-1）。　　2.3供试品溶液的制备　　精密称取卷柏药材（过3号筛）粉末约4.00g，置100ml圆底烧瓶中，精密加入95％乙醇40ml，85℃回流2次，2h/次，提取液回收溶剂，真空干燥。精密称取干燥恒重的乙醇提取物约3.00mg，置100ml容量瓶中加95%乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。　　2.4线性关系考察　　精密吸取对照品溶液0，2，4，6，8，10，12μl依次进样，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归，得回归方程为：Y=23

6、46639X+6411.314（r=0.9998）。结果表明阿曼托双黄酮在(0.1～0.6)μg·ml-1浓度范围内线性关系良好。　　2.5精密度实验　　　精密吸取50μg·ml-1对照品溶液，重复进样6次，10μl/次，测定峰面积值，计算相对标准差，结果RSD=0.92%，显示精密度良好。　　2.6重复性实验　　精密称取同一样品（产地：河南）适量，照“2.3”方法分别制备供试品溶液6份，照“2.1”法进行测定，结果平均含量为1.19%，RSD=0.13%，表明本测定方法的重复性良好。　　2.7稳定性实验　　　取同一样品(产地：河南)适量，照“

7、2.3”方法制备供试品溶液，室温下放置0，2，4，6，8，12，24，48h进样10μl，依法测定阿曼托双黄酮的峰面积值，计算相对标准偏差，RSD为0.35%。结果表明，供试品溶液室温下48h内稳定。　　2.8加样回收率实验　　照“2.3”方法制备供试品（产地：河南）乙醇提取物，精密称取已知含量的卷柏乙醇提取物样品9份，每份约3.00mg，分为3组，每组中分别加入精密称定的阿曼托双黄酮0.10，0.20，0.30mg，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法配制回收率供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表1。结果表明，阿

8、曼托双黄酮回收率实验良好。表1阿曼托双黄酮回收率实验（略）　　2.9样品含量测定　　分别精密称取10批不同产地卷柏药材粉末各4.0g，按“2.3”项方