药品分析方法建立及验证——从质量控制出发ppt课件

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1、药品分析方法建立及验证——从质量控制出发2016.03.23健康元生物医药有限公司目录方法开发考虑方法哪里来开发什么方法检测方法初识分析方法验证分析方法确认及再验证方法考虑原则预期的监督机构期望产品质量参数对安全性和有效性的预期影响分子的具体开发经验来自之前以开发的类似分子的平台经验方法开发考虑折叠结构可以防止生物制品降解，但同时使分子的某些部分难以被检测到被结构所保护的易受影响基团延缓了降解过程（氧化、脱酰胺基、切断和聚合）完整结构使得分析方法很难检测到内部的变化在某些分析中保持三维结构是很重要的（如SEC），但在其他一些分析中则需拆开折叠结

2、构（如变性凝胶电泳）方法开发考虑如何解释不是针对完整分子而是针对裂解部分所进行的检测而获得的数据有时有必要将一个蛋白分子裂解为所需的片段，然后对所关注的片段进行分析，如用于蛋氨酸氧化测定肽图多数时候片段并非以简单直接或线性的方式与完整分子相关联（不再是1：1）需要明确地确定完整分子的片段进行分析而得到的某些参数的报告值方法开发考虑从不同正交试验或从主要和辅助试验所得的杂质量并不是可以累加的生物制品需要多项检测来检量其多种特性，如电荷、分子大小等如果一个分子包含多种修饰，则它将被多次计算，但是降解的分子仍然只有一个所以不同检测所得到的值是不能累加

3、的方法开发考虑对于所要分析的蛋白质物种，通常无法获得纯的样品用来进行加样/回收的物质是所要分析的蛋白质物种（杂质）的富集物，而不是纯化物很多时候，峰并不能达到基线分离可容许实验误差较大定量限较高方法开发考虑基质（配方组成）或酸碱度变化、自由巯基的出现等，可能在分析过程中形成原来并不存在的杂质通过溶液交换消除基质影响减少暴露于过高或过低酸碱度溶液的时间在某些特定方法中，自由巯基会导致分析方法造成的杂质这些都是要设法避免方法开发考虑1.生物学活性：是反映生物技术药物质量的重要指标，通常使用细胞或动物进行测定，误差相对较大。不同批细胞、血清、或其它易

4、变性物质对测定方法的准确度和精密性均有影响。2.生物技术药物多为生物大分子药物，具有分子量大、结构多样性和可变性等特点，结构的细微变化可影响药物的活性和质量。3.对酸、碱、高温、冻融等不稳定，保存、运输条件不当会影响药品质量，并可能导致方法转移困难或失败。4.标准物质：活性标准品、含量标准品、理化对照品，根据情况可能分别制备，保存、运输条件相对较高，需对其稳定性进行认真分析与评价。方法哪里来标准方法（或正式方法、法定方法）一般是指已有国家标准的质控方法，WHO推荐的质控方法也可作为重要参考。此类方法在被确定为标准方法前已经过了适当的验证。申报者

5、应说明方法的来源，并附具体方法。研制单位在首次采用此类方法前，也应对该方法进行适当的验证，如进行专属性和精密度的验证，以便证明在实际的使用条件下该方法也是适用的。标准方法的替代方法此类方法系指由申报者提出的可取代标准方法的替代方法。申报者在决定采用此类方法时应持慎重的态度，并需提供表明新方法等同于或优于原方法的依据以及全面的验证资料，包括两种方法的比较性资料。来自参考文献的方法是指在专业杂志或著作上发表并介绍的方法，一般要认真对待此类方法，并需进行全面的验证。应说明参考文献的出处，附原文及译文。自己建立的方法对于某些产品，尤其是创新性产品来讲，

6、由于缺少可参考的方法，通常需要自己建立一种新的分析方法，对于这类方法需进行全面而严格的验证。开发什么方法适用于所有分子的方法蛋白浓度或含量紫外/可见光光度法（基于消光系数，灵敏度低，干扰物多）高效液相色谱法（基于标准样校正）BCA/TCA/G250（基于标准样校正，基质有可能干扰)电荷概括离子交换色谱（原始状态）毛细管等电聚焦法（原始状态和局部变性状态）开发什么方法适用于所有分子的方法分子大小概况SEC（原始状态）凝胶电泳法（非折叠（变性）状态）病毒样颗粒概况电镜（局部原始状态，人为影响因素大）DLS（原始状态，分辨率差，大小精准）SEC（原始

7、状态，流动相会影响蛋白状态）开发什么方法适用于所有分子的方法杂质残留量HPLC（基于标准样校正或自身对照）GC（对残留溶剂）ICP/AAS（对元素测定）Elisa（宿主蛋白、杂蛋白测定）SouthernBlot/荧光光谱（残留DNA）开发什么方法适用于特定分子的方法分子鉴定肽图（纯度较高）WesternBlot（使用范围广）紫外扫描图（纯度及基质要求高）氨基酸测序(纯度及基质要求高，样品末端无封闭）偶联密度ADC（抗体药物偶联物）抗原与载体蛋白偶联物（疫苗类药物）结合力抗原与佐剂相互作用开发什么方法适用于特定分子的方法活性测定Elisa（体外评

8、价）动物实验（体内评价）中和实验（细胞测定特定表位）降解物测定HPLC/MS（基于标准样校正或自身对照）凝胶电泳（基于特异分子带）SEC/荧光光谱（解